MycoStrip™—细胞支原体污染检测技巧

支原体污染是细胞培养中一个主要的污染问题,能够严重影响实验结果的重现性和有效性。invivogen公司凭借40多年为科学界开发支原体解决方案的经验,开发了简单可靠的检测细胞培养支原体污染的mycostrip™试剂盒,基于等温pcr的技术检测支原体污染,在5分钟内就能于免疫层析试纸条上快速显示结果。如需购买该产品,请联系invivogen代理商欣博盛生物。
支原体属于柔膜菌纲,其成员特征为缺乏细胞壁以及拥有多变的形态。支原体对包括原代细胞在内的所有真核细胞类型具有高度传染性。成百上千的支原体可以附着在一个细胞上,与细胞膜融合、繁殖,最终数量可以超过培养细胞1000倍。支原体没有细胞壁的特点使它们对常用的抗生素(如青霉素和链霉素)产生抗性。 此外,它们的尺寸微小(~100 nm),能够穿透过 0.2 μm 的标准过滤膜。支原体与宿主细胞竞争营养素和代谢物前体,它们能改变许多细胞功能,影响到细胞代谢和细胞生长,最终导致细胞死亡。因此,我们需要采取预防措施来防止细胞培养物受到污染。
目前的支原体检测方法大多费时费力。japanese cell bank验证了由invivogen开发的基于等温pcr的支原体快速检测试剂盒mycostrip的有效性,并将其检测灵敏度与其他检测方法进行了比较。实验中,将m. hyorhinis支原体(nbrc 14858)加入到vero细胞(jcrb0111)中进行培养,稀释后的样品分别用mycostrip、生物发光法(bioluminescence assay)、荧光染色法(fluorescent staining)和nested-pcr进行检测。经证实,mycostrip的灵敏度与荧光染色的灵敏度相当,显示出足够的检测效率证明了基于等温pcr的mycostrip是一种简单且高度通用的支原体检测方法,因为该检测方法不需要特殊设备,将试剂与样品混合并滴在试纸上即可轻松快速地获得结果。mycostrip可普遍用于支原体污染的常规检测。
mycostrip™ 优势
•简单:只需要一个加热块
•快速:2—5分钟内显示结果
•轻松解读:试纸条上出现一或两条条带
•最少的操作时间:<15分钟
•总检测时长:<1小时
•灵敏度高:检测限低至1 x 102cfu/ml
•特异性高:无交叉反应
•稳定:试剂盒可在-20°c下保存1年
使用mycostrip™检测支原体
mycostrip™专门设计用于检测最常污染细胞培养的支原体和无胆甾原体,其中包括导致95%细胞培养污染的六个物种。重要的是,使用mycostrip™不会与任何其他细菌、真菌或哺乳动物dna发生交叉反应。
4 个简单步骤检测细胞培养物中的支原体
50 和100 strips的规格还可以提供不带卡壳的形式,更经济、环保。
产品组份
with cassette
without cassette
产品名称
mycostrip™
mycostrip™ 50
mycostrip™ 100
产品货号
rep-mys-10
rep-mys-20
rep-mys-50
rep-mysnc-50
rep-mysnc-100
组分
10 tests
20 tests
50 tests
50 tests
100 tests
•reaction mix
1 vial
2 vials
5 vials
5 vials
10 vials
•reaction buffer
1 vial
2 vials
4 vials
4 vials
8 vials
•migration buffer
2 vials
3 vials
1 bottle
1 bottle
2 bottles
•positive control
1 vial
1 vial
1 vial
1 vial
2 vials
•detection strips
10
20
50
50
100
结果示例
常见问题
1.如果支原体检测呈阳性怎么办?
invivogen有解决方案!可以使用invivogen全面的抗支原体试剂清除和预防污染。推荐用plasmocin™ 或plasmocure™ ,治疗完成后(约2周),使用mycostrip™重新检测。
2.收集的待测上清液中含有一些细胞,会干扰检测吗?
无需担心,哺乳动物细胞dna的存在不会影响检测分析。
3.样品制备过程中,将样品加热到95°c是否有好处?
敏感度没有提高,但此步骤可以杀死支原体,避免接触活的支原体。
4.是否每次使用mycostrip™时都需要设立阳性和阴性对照?
包括阳性和阴性对照的定期监测,对于结果的可靠性以及故障排除很重要。
5.在什么阶段可以冻存样品以供后续检测分析?
可以按照以下方式储存样本:
• 细胞培养上清液:在开始“样品制备”方案之前,可以将上清液储存在-20°c直到需要使用时。使用前,将样品在37°c下完-全解冻,涡旋充分混匀以确保所有盐溶解。
•已制备的样品:执行“样品制备”方案的步骤1-4之后,可以将样品存储在-20°c直至需要使用时。
•处理过的样品:执行“检测分析”方案的步骤1-4之后,处理过的样品在-20°c下最多保存3个月。
6. 有一个样本的测试带模糊,不能确定是否应将其视为支原体污染的阳性结果?
如果其中一个样品上观察到一条微弱的条带,可以认为这是支原体污染的阳性结果。建议使用以下方法确认此结果:
•浓缩样品:使用更大体积的上清液并重复“样品制备”方案中步骤2-3。使用mycostrip™重新检测浓缩后的样品。
•在使用mycostrip™重新检测之前,继续培养细胞48小时。
•使用无菌水(不含核酸酶)替代pbs重悬样品,以提高检测的灵敏度。
7. 实验室中没有热循环仪,可以使用什么代替?
可以使用校准过的加热块或水浴代替。请注意,使用水浴可能会引入新的污染源。
8. 如果将准备好的样品在加热块上放置了一个多小时,是否仍然能使用该样品?
在65°c下孵育40分钟以上会显著影响检测结果,因此不建议继续使用此样品。
mycostrip™相关产品推荐
产品货号 产品名称
规格
产品说明
rep-pt1
plasmotest™
1 kit (250 samples)
细胞比色分析法检测支原体污染
pt-ctr2
plasmotest™ controls
200 tests
plasmotest™试剂盒对照
rep-ptrk
plasmotest™ reagent kit
500 samples
plasmotest™试剂盒补充试剂
ant-mpp
plasmocin®prophylactic
25 mg (10 x 1 ml)
支原体预防试剂
ant-mpt
plasmocin®treatment
50 mg (2 x 1 ml)
支原体清除试剂
ant-mpt-1
plasmocin®treatment
25 mg (1 x 1ml)
支原体清除试剂
ant-pc
plasmocure™
100 mg (1 ml)
强效支原体清除抗生素,适合用于带有plasmocin抗药性支原体
详情请联系 invivogen 全国代理-欣博盛生物

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