β-葡萄糖醛酸苷酶(β-GD)测定试剂盒的操作过程

β-葡萄糖醛酸苷酶(β-gd)测定试剂盒的操作过程
(测外源型 比色法)
一、测定原理:
β-葡萄糖醛酸苷酶(β-glucuronidase,β-gd)作用于专一性底物释放出游离的酚-酞,用比色法测定游离
酚-酞的量表示酶的活力。
二、试剂的组成和配制(50t/48 样):
试剂一:粉剂×3 支;临用前每支粉剂中加入 1.0ml 的试剂二(外源性),充分混匀后-20℃以下保存;
试剂二(外源性):液体 15ml×1 瓶;4℃保存;
试剂三:液体 100ml×1 瓶;4℃保存
试剂四:1umol/ml 酚-酞标准 1ml×1 支;4℃避光保存。
三、操作过程:
1、前处理:
10%组织匀浆上清液的制备:准确称取组织重量,按重量(g):体积(ml)=1:9 的比例,加入 9 倍体积的
生理盐水,冰水浴条件下机械匀浆,2500 转/分,离心 10 分钟,取上清液进行
测定。
2. 操作表:
四、计算公式及举例:
1、单位定义:每毫克组织蛋白在 37℃条件下,每分钟能催化生成 1μmol 的酚-酞的酶量就是 1 个酶活力单位。
2、计算公式:
五、测定意义:
β-葡糖醛酸苷酶广泛存在于机体组织中,除肝、脾、肾上腺外,胃肠道粘膜含量也较丰富,它具有水解
固醇葡萄糖醛酸和酸性粘多糖的生理功能。胃癌组织内此酶活力要显著高于十二指肠溃疡的胃组织,胃癌组织
内此酶含量丰富,主要分布于癌细胞内;胃癌患者胃粘膜表面覆盖着具有此酶强活力的膜状物。这样当含丰富
酶的癌细胞破碎时,胞浆中此酶即进入胃液。测定胃液β-葡糖醛酸苷酶活力对于研究胃癌有重要的意义。
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