emfret-心血管和血液系统研究用抗体供应商
emfret成立于2002年，emfret公司专注心血管和血液系统研究用抗体研发和生产，emfret公司的抗体不仅适用于流式分析、wb检测，还可用于免疫组化/免疫荧光及免疫共沉淀检测。
产品列表
货号
产品名称
规格
m011-0
mouse gpvi（起发现货）
0.1 mg
m011-1
mouse gpvi（起发现货）
1.5 ml
m025-0
integrin alphaiibbeta3 (gpiib/iiia, cd41/cd61)
0.5 mg
m025-1
integrin alphaiibbeta3 (gpiib/iiia, cd41/cd61)
1.5 ml
m025-2
integrin alphaiibbeta3 (gpiib/iiia, cd41/cd61)
1.5 ml
m025-3
integrin alphaiibbeta3 (gpiib/iiia, cd41/cd61)
1.5 ml
m021-0
integrin alphaiibbeta3 (gpiib/iiia, cd41/cd61)
0.5 mg
m021-1
integrin alphaiibbeta3 (gpiib/iiia, cd41/cd61)
1.5 ml
m022-0
integrin alphaiibbeta3 (gpiib/iiia, cd41/cd61)
0.5 mg
m023-2
integrin alphaiibbeta3 (gpiib/iiia, cd41/cd61)（起发现货）
1.5 ml
m024-0
integrin alphaiib (gpiib, cd41)
6 mg
m030-0
integrin beta3 chain (gpiiia, cd61)
0.5 mg
m031-0
integrin beta3 chain (gpiiia, cd61)
0.5 mg
m031-1
integrin beta3 chain (gpiiia, cd61)
1.5 ml
m040-0
gpibalpha (cd42b)
0.5 mg
m040-1
gpibalpha (cd42b)
1.5 ml
m040-2
gpibalpha (cd42b)（起发现货）
1.5 ml
m040-3
gpibalpha (cd42b)（起发现货）
1.5 ml
m041-0
gpibalpha (cd42b)
0.5 mg
m041-1
gpibalpha (cd42b)
1.5 ml
m042-0
gpibalpha (cd42b)（起发现货）
0.5 mg
m042-1
gpibalpha (cd42b)
1.5 ml
m043-0
gpibalpha (cd42b)（起发现货）
0.5 mg
m043-1
gpibalpha (cd42b)（起发现货）
1.5 ml
m050-0
gpibbeta (cd42c)mouse and human
0.5 mg
m050-1
gpibbeta (cd42c)mouse and human（起发现货）
1.5 ml
m051-0
gpix (cd42a)
0.5 mg
m051-1
gpix (cd42a)
1.5 ml
m060-1
gpv (cd42d)
1.5 ml
m061-0
gpv (cd42d)
0.5 mg
m061-1
gpv (cd42d)
1.5 ml
m070-0
integrin alpha2 chain (cd49b, gpia)
0.5 mg
m070-1
integrin alpha2 chain (cd49b, gpia)
1.5 ml
m071-0
integrin alpha2 chain (cd49b, gpia)
0.5 mg
m071-1
integrin alpha2 chain (cd49b, gpia)
1.5 ml
m080-0
integrin alpha5 chain (cd49e)mouse and human
0.5 mg
m080-1
integrin alpha5 chain (cd49e)mouse and human
1.5 ml
m110-0
cd9
0.5 mg
m110-1
cd9
1.5 ml
m120-0
cd31 (pecam-1)
0.5 mg
m130-0
cd62p (p-selectin)
0.5 mg
m130-1
cd62p (p-selectin)
1.5 ml
m130-2
cd62p (p-selectin)
1.5 ml
p150-1
von willebrand factor (vwf)
1.5 ml
p140-1
fibrinogen
1.5 ml
p180-1
negative control
1.0 ml
p190-1
negative control
1.0 ml
p190-2
negative control
1.0 ml
p190-3
negative control
1.0 ml
r300
antibodies for mouse platelet depletion（起发现货）
0.5 mg
c301
antibodies for mouse platelet depletion（起发现货）
0.5 mg
d200
two-color analysis of mouse platelet activation
2.0 ml
x488
in vivo mouse platelet labeling
0.1 mg
x649
in vivo mouse platelet labeling（起发现货）
0.1 mg
抗体相关实验技术protocols
一、小鼠血小板表面糖蛋白的流式细胞术分析
缓冲液和试剂准备：
tris缓冲盐水/肝素（tbs/hep）：20 mm tris/hcl；137 mm nacl；ph 7.3；含有20 u/ml肝素。
磷酸盐缓冲液（pbs）：137 mm nacl；2.7 mm kcl；1.5 mm kh2po4；8 mm na2hpo4；ph 7.14。
改良台氏液/改良tyrode''s溶液：134 mm nacl；0.34 mm na2hpo4；2.9 mm kcl；12 mm nahco3；20 mm hepes；ph 7.0；5 mm葡萄糖；0.35%（w/v）牛血清白蛋白。
腺苷三磷酸双磷酶apyrase：溶于水（10 u/ml），在-20°c下储存。
前列环素prostaglandin（prostaglandin 2, pgi2）：溶于水（1 mm），在-20°c下储存。
cacl2：1 m溶于水。
稀释或洗涤全血的制备：
1、用肝素化玻璃毛细管（如环帽）从眶后神经丛抽取50 µl血液，放入1.5 ml含有200 µl tris缓冲盐水/肝素（20 u/ml）的试管中。
2、在1 ml tyrode缓冲液中稀释，用于流式细胞仪分析。
3、为了制备洗涤过的血液，将稀释的血液以900 x g离心5分钟，去除上清液，并将沉淀重悬在1.25 ml tyrode缓冲液中。
4、在实验开始前直接加入1 mm cacl2。
注：对于凝血酶诱导的血小板活化，必须去除血浆以防止抗凝血酶活性。
血小板制备：
1、制备洗涤过的血小板是一种更耗时的方法，需要大量的血液，但产生的血小板制剂可以使用数小时。
2、用1.5 cm玻璃毛细管从眶后丛收集0.5-1 ml血液，放入含有200 µl tbs/肝素（20 u/ml）的1.5 ml管中。去除含有一些红细胞的上清。
3、以500 x g离心样品5分钟，并将富含血小板的血浆（prp）转移到新的试管中。
4、将血小板悬浮液以300 x g离心8分钟，并将不含任何红细胞的prp转移到新的试管中。
5、加入0.5 µm前列环素（pgi2），以1300 x g离心5分钟。
6、将血小板颗粒重新悬浮在1 ml tyrode缓冲液中，加入0.02 u/ml腺苷三磷酸双磷酶和0.5 µm前列环素，在37℃下孵育5分钟，并在1300 x g下离心5分钟。
7、重复步骤5，将血小板颗粒重悬于0.5 ml tyrode缓冲液中，加入0.02 u/ml腺苷三磷酸双磷酶，并在37℃下孵育30分钟。
血小板表面糖蛋白的单色分析：
1、将5 µl特异性或阴性对照抗体和25 µl稀释的全血在分析管中混合，涡旋混匀1-2秒。
2、在室温下孵育15分钟。
3、加入400 µl pbs停止反应，并在30分钟内进行分析。
如所述，将样品与fitc缀合的对照igg（黑线）、gpvi抗体或gpv抗体孵育。血小板通过前向散射（fsc）/侧散射（ssc）血小板通过前向（fsc）/侧向（ssc）散射特征进行筛选。在单独的直方图中显示了被筛选（r1）的血小板的荧光（fl1）强度。rbc：红细胞。
血小板活化的双色分析：
1、将5 µl特异性或阴性对照抗体与5 µl泛血小板标记物一起加入测定管中。
2、此时，加入小体积（<5 µl）的任何额外的试剂（如抑制剂）。
3、加入26 µl稀释的全血或经洗涤过的血小板（100万），涡旋混匀1-2秒。
在室温下孵育15分钟。加入400 µl pbs停止反应，并在30分钟内进行分析。
小鼠血小板分别与pbs或0.1 u/ml的凝血酶（thrombin）一起与fitc和pe结合的mabs一起孵育。通过gpix或gpiibiiia（fl1; gate 1）的表达对血小板进行了筛选。
二、免疫组织化学（用丙酮固定冷冻切片）
请注意：不建议在（对）甲醛固定的样本上进行免疫组织化学染色，因为大多数大鼠抗体在这些条件下对小鼠组织的效果很差。
1、将冷冻组织的切片放在玻片上，并在4°c下的冰冷100%丙酮中固定20分钟。在室温下干燥一整夜。
2、为了减少试剂的用量，在玻片上的组织切片周围可以用防水笔画一个疏水圈。在所有后续的步骤中，这个圈起来的区域都不应该干燥。因此，建议在潮湿的盒子中进行孵育步骤。
3、在pbs中孵育玻片20分钟。
4、使用过氧化物酶结合的二抗时，将玻片在室温下与0.03%的h2o2孵育10分钟以抑制内源过氧化物酶活性。在pbs中三次洗涤玻片，每次5分钟。
5、用pbs稀释（比例1:10或1:100）的封闭液（二抗体宿主物种的血清），室温下孵育玻片1小时。
6、一抗（2-10 µg/ml）室温孵育2小时。
7、吸取多余液体，然后在pbs中洗涤三次，每次5分钟。
8、用荧光素或过氧化物酶结合的二抗（例如：亲和纯化的驴抗大鼠igg-fitc或hrp）覆盖玻片，按照说明书在封闭液中稀释，室温下孵育1小时。
9、吸取多余液体，pbs洗涤三次，每次5分钟。
10、荧光染色的样本可以直接通过荧光显微镜分析。
11、为了可视化过氧化物酶标记的组织，用新鲜制备的3-氨基-9-乙基咔唑（aec）底物覆盖玻片，并在显微镜下可见红色染色，时间可在5至30分钟之间变化。在橙色背景染色出现之前，用去离子水冲洗停止反应。用伊红染色30-240秒，然后在温水中冲洗玻片20分钟。使用水溶性封装溶液固定切片。
三、免疫沉淀
缓冲液和试剂准备：
pbs/edta：137 mm nacl、2.7 mm kcl、1.5 mm kh2po4、8.0 mm na2hpo4 x 2h2o，ph 7.3；5 mm edta。
ip缓冲液：40 mm tris/hcl、0.3 m nacl、1 mm edta、2 mm pmsf、10 µg/ml leupeptin蛋白酶抑制剂、10 µg/ml aprotinin抑肽酶、1 µg/ml pepstatin胃蛋白酶抑制剂。
igepal非离子表面活性剂：10%的h2o溶液。
2x sds样品缓冲液：10% β-巯基乙醇（用于还原缓冲液）、10% tris缓冲液（1.25 m）、20%甘油、4%sds、0.02%溴酚蓝。
1、将小鼠血小板或细胞在1 ml pbs/edta（5分钟，1300 x g）中洗涤3次，并使用ip缓冲液重悬。
2、加入1% igepal 在室温下溶解血小板（15–20分钟）。
3、10000 x g下离心5分钟去除细胞碎片，并将上清液转移到新的试管中。
4、加入20 µl洗涤过的protein g agarose（pga）。在4°c下混匀孵育至少3小时。
5、3000 x g离心样品5分钟。将上清液转移到新的试管中，以说明书中给定的浓度（通常在2-5 µg/ml之间）加入抗体，30分钟后加入25 µl洗涤过的pga。在4°c下混匀孵育至少2小时，最好过夜。
6、将样品在3000 x g下离心1分钟，向pga中加入1 ml含有1% igepal的1 x ip缓冲液。在3000 x g下离心1分钟。
7、用ip缓冲液中洗涤pga两次（3000 x g离心1分钟）。
8、加入25 µl 1x sds样品缓冲液（还原或非还原），将pga重悬，煮沸5分钟。9、然后将样品冷冻（-20°c）以备日后使用，或者进行sds-page和免疫印迹分析。
四、免疫印迹分析（western blot analysis）
缓冲液和试剂准备：
裂解缓冲液：40mm tris/hcl、0.3 m nacl、1 mm edta、0.05% nan3、1% igepal。
pbs：137 mm nacl、2.7 mm kcl、1.5 mm kh2po4、8.0 mm na2hpo4 x 2h2o，ph 7.3。
5%脱脂牛奶-pbs：含5%脱脂奶粉的pbs。
pbs/t：pbs含0.1%吐温20。
1%脱脂牛奶-pbs/t：含1%脱脂牛奶的pbs/t。
所有步骤都可在室温下进行：
1、在裂解缓冲液中制备小鼠血小板或细胞的裂解物，并与（2x）sds样品缓冲液在95°c下孵育5分钟。
2、根据说明书，在还原或非还原条件下，通过sds聚丙烯酰胺凝胶电泳（sds-page）分离蛋白质，并将蛋白质转移到pvdf膜上。
3、用5%脱脂牛奶封闭膜1小时。
4、加入pbs/t-1%牛奶稀释的一抗（2-5 µg/ml），孵育1小时。
5、用pbs/t冲洗膜两次，30分钟。洗涤程序可以减少到三次，每次10分钟。
6、加入pbs/t-1%牛奶稀释的二抗（hrp偶联的抗大鼠ig），孵育45-60分钟。
7、用pbs/t冲洗膜两次，30分钟。
8、使用ecl（化学发光）显色。
下图为emfret公司授权上海起发在中国区域的代理的授权书。
emfret热卖产品
货号
产品名称
规格
品牌
r300
antibodies for mouse platelet depletion（现货）
0.5 mg
emfret
m023-2
integrin alphaiibbeta3 (gpiib/iiia, cd41/cd61)（现货）
1.5 ml
emfret
x488
anti - gpibbeta derivative rat igg dylight 488 in vivo platelet labeling
100 μg
emfret
c301
sterile non-immune rat igg（现货）
0.5 mg
emfret
m040-1
gpibalpha (cd42b)（现货）
1.5 ml
emfret
d200
jon/a rat igg2b pe flow cytometry 1 ml
200 tests
emfret
x649
in vivo mouse platelet labelingclone：anti - gpibbeta derivative isotype：rat igg 标记：dylight 649 appli（现货）
0.1 mg
emfret
m040-2
xia.g5 rat igg2b pe fc（现货）
1.5 ml
emfret
m011-1
jaq1/ rat (wistar) igg2a fitc fc（现货）
1.5 ml
emfret
m130-1
cd62p (p-selectin)
1.5 ml
emfret
m040-3
gpibalpha (cd42b)（现货）
1.5 ml
emfret
m043-0
gpibalpha (cd42b) xia.b2 rat igg2a purif. （现货）
0.5 mg
emfret
m050-1
gpibbeta (cd42c)xia.c3 rat igg2a fitc（现货）
1.5 ml
emfret
m025-1
integrin alphaiibbeta3 (gpiib/iiia, cd41/cd61) leo.f2 rat igg2afitc
1.5 ml
emfret
m042-0
xia g7 rat igg1 purif（现货）
0.5 mg
emfret
m051-1
gpix (cd42a) xia.b4 rat igg1
1.5 ml
emfret
m011-0
gpvi jaq1 rat igg2a purif（现货）
0.1 mg
emfret
m021-1
integrin alphaiibbeta3 (gpiib/iiia, cd41/cd61) leo.h4 rat igg2b
1.5 ml
emfret
m130-2
cd62p (p-selectin) wug.e9 rat igg
1.5 ml
emfret
m050-0
gpibbeta (cd42c) mouse and humanclone：xia.c3 isotype：rat igg2a 标记：purif.
0.5 mg
emfret
m043-1
gpibalpha (cd42b) xia.b2 rat igg2a（现货）
1.5 ml
emfret
m070-1
integrin alpha2 chain (cd49b, gpia) sam.g4 fitc
1.5 ml
emfret
m071-1
integrin alpha2 chain (cd49b, gpia) sam.c1 fitc
1.5 ml
emfret
m120-0
cd31 (pecam-1) pec.h3 purif.
0.5 mg
emfret
m051-0
purified rat anti-mouse gpix (cd42a)
0.5 mg/ml
emfret
p140-1
fibrinogen polyclonal rabbit iggfitc fc
1.5 ml
emfret
p150-1
von willebrand factor (vwf)
1.5 ml
emfret
p190-2
negative control polyclonal rat iggpe fc
1.0 ml
emfret
m030-0
integrin beta3 chain (gpiiia, cd61) luc.a5 rat igg2apurif.
0.5 mg
emfret
m025-2
integrin alphaiibbeta3 (gpiib/iiia, cd41/cd61)
1.5 ml
emfret
m025-3
integrin alphaiibbeta3 (gpiib/iiia, cd41/cd61)
1.5 ml
emfret
作为emfret在中国区域的代理商，上海起发将为中国客户提供全面的emfret产品。欢迎大家随时联系我们！！！
上海起发实验试剂有限公司是进口品牌innovrsrch、abbiotec、alzet、sysy、biorelevant、mybiosource、abbexa、progen、absoluteantibody、moradec、spherotech、worthington......，国产品牌opmbiosciences、elabscience、耐思、碧云天、博奥森、raybiotech、procell、origene、apexbt、罗恩、奥浦迈、麦克林、成都正能、fn-test、uelandy、天净沙、杭州博日、君研生物、蓝图生物、科佰迪、华美、uelandy inc（试剂）......等300多个品牌中国授权代理，更多请查询上海起发实验试剂有限公司网站。
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产品列表
货号
产品名称
规格
m011-0
mouse gpvi（起发现货）
0.1 mg
m011-1
mouse gpvi（起发现货）
1.5 ml
m025-0
integrin alphaiibbeta3 (gpiib/iiia, cd41/cd61)
0.5 mg
m025-1
integrin alphaiibbeta3 (gpiib/iiia, cd41/cd61)
1.5 ml
m025-2
integrin alphaiibbeta3 (gpiib/iiia, cd41/cd61)
1.5 ml
m025-3
integrin alphaiibbeta3 (gpiib/iiia, cd41/cd61)
1.5 ml
m021-0
integrin alphaiibbeta3 (gpiib/iiia, cd41/cd61)
0.5 mg
m021-1
integrin alphaiibbeta3 (gpiib/iiia, cd41/cd61)
1.5 ml
m022-0
integrin alphaiibbeta3 (gpiib/iiia, cd41/cd61)
0.5 mg
m023-2
integrin alphaiibbeta3 (gpiib/iiia, cd41/cd61)（起发现货）
1.5 ml
m024-0
integrin alphaiib (gpiib, cd41)
6 mg
m030-0
integrin beta3 chain (gpiiia, cd61)
0.5 mg
m031-0
integrin beta3 chain (gpiiia, cd61)
0.5 mg
m031-1
integrin beta3 chain (gpiiia, cd61)
1.5 ml
m040-0
gpibalpha (cd42b)
0.5 mg
m040-1
gpibalpha (cd42b)
1.5 ml
m040-2
gpibalpha (cd42b)（起发现货）
1.5 ml
m040-3
gpibalpha (cd42b)（起发现货）
1.5 ml
m041-0
gpibalpha (cd42b)
0.5 mg
m041-1
gpibalpha (cd42b)
1.5 ml
m042-0
gpibalpha (cd42b)（起发现货）
0.5 mg
m042-1
gpibalpha (cd42b)
1.5 ml
m043-0
gpibalpha (cd42b)（起发现货）
0.5 mg
m043-1
gpibalpha (cd42b)（起发现货）
1.5 ml
m050-0
gpibbeta (cd42c)mouse and human
0.5 mg
m050-1
gpibbeta (cd42c)mouse and human（起发现货）
1.5 ml
m051-0
gpix (cd42a)
0.5 mg
m051-1
gpix (cd42a)
1.5 ml
m060-1
gpv (cd42d)
1.5 ml
m061-0
gpv (cd42d)
0.5 mg
m061-1
gpv (cd42d)
1.5 ml
m070-0
integrin alpha2 chain (cd49b, gpia)
0.5 mg
m070-1
integrin alpha2 chain (cd49b, gpia)
1.5 ml
m071-0
integrin alpha2 chain (cd49b, gpia)
0.5 mg
m071-1
integrin alpha2 chain (cd49b, gpia)
1.5 ml
m080-0
integrin alpha5 chain (cd49e)mouse and human
0.5 mg
m080-1
integrin alpha5 chain (cd49e)mouse and human
1.5 ml
m110-0
cd9
0.5 mg
m110-1
cd9
1.5 ml
m120-0
cd31 (pecam-1)
0.5 mg
m130-0
cd62p (p-selectin)
0.5 mg
m130-1
cd62p (p-selectin)
1.5 ml
m130-2
cd62p (p-selectin)
1.5 ml
p150-1
von willebrand factor (vwf)
1.5 ml
p140-1
fibrinogen
1.5 ml
p180-1
negative control
1.0 ml
p190-1
negative control
1.0 ml
p190-2
negative control
1.0 ml
p190-3
negative control
1.0 ml
r300
antibodies for mouse platelet depletion（起发现货）
0.5 mg
c301
antibodies for mouse platelet depletion（起发现货）
0.5 mg
d200
two-color analysis of mouse platelet activation
2.0 ml
x488
in vivo mouse platelet labeling
0.1 mg
x649
in vivo mouse platelet labeling（起发现货）
0.1 mg
抗体相关实验技术protocols
一、小鼠血小板表面糖蛋白的流式细胞术分析
缓冲液和试剂准备：
tris缓冲盐水/肝素（tbs/hep）：20 mm tris/hcl；137 mm nacl；ph 7.3；含有20 u/ml肝素。
磷酸盐缓冲液（pbs）：137 mm nacl；2.7 mm kcl；1.5 mm kh2po4；8 mm na2hpo4；ph 7.14。
改良台氏液/改良tyrode''s溶液：134 mm nacl；0.34 mm na2hpo4；2.9 mm kcl；12 mm nahco3；20 mm hepes；ph 7.0；5 mm葡萄糖；0.35%（w/v）牛血清白蛋白。
腺苷三磷酸双磷酶apyrase：溶于水（10 u/ml），在-20°c下储存。
前列环素prostaglandin（prostaglandin 2, pgi2）：溶于水（1 mm），在-20°c下储存。
cacl2：1 m溶于水。
稀释或洗涤全血的制备：
1、用肝素化玻璃毛细管（如环帽）从眶后神经丛抽取50 µl血液，放入1.5 ml含有200 µl tris缓冲盐水/肝素（20 u/ml）的试管中。
2、在1 ml tyrode缓冲液中稀释，用于流式细胞仪分析。
3、为了制备洗涤过的血液，将稀释的血液以900 x g离心5分钟，去除上清液，并将沉淀重悬在1.25 ml tyrode缓冲液中。
4、在实验开始前直接加入1 mm cacl2。
注：对于凝血酶诱导的血小板活化，必须去除血浆以防止抗凝血酶活性。
血小板制备：
1、制备洗涤过的血小板是一种更耗时的方法，需要大量的血液，但产生的血小板制剂可以使用数小时。
2、用1.5 cm玻璃毛细管从眶后丛收集0.5-1 ml血液，放入含有200 µl tbs/肝素（20 u/ml）的1.5 ml管中。去除含有一些红细胞的上清。
3、以500 x g离心样品5分钟，并将富含血小板的血浆（prp）转移到新的试管中。
4、将血小板悬浮液以300 x g离心8分钟，并将不含任何红细胞的prp转移到新的试管中。
5、加入0.5 µm前列环素（pgi2），以1300 x g离心5分钟。
6、将血小板颗粒重新悬浮在1 ml tyrode缓冲液中，加入0.02 u/ml腺苷三磷酸双磷酶和0.5 µm前列环素，在37℃下孵育5分钟，并在1300 x g下离心5分钟。
7、重复步骤5，将血小板颗粒重悬于0.5 ml tyrode缓冲液中，加入0.02 u/ml腺苷三磷酸双磷酶，并在37℃下孵育30分钟。
血小板表面糖蛋白的单色分析：
1、将5 µl特异性或阴性对照抗体和25 µl稀释的全血在分析管中混合，涡旋混匀1-2秒。
2、在室温下孵育15分钟。
3、加入400 µl pbs停止反应，并在30分钟内进行分析。
如所述，将样品与fitc缀合的对照igg（黑线）、gpvi抗体或gpv抗体孵育。血小板通过前向散射（fsc）/侧散射（ssc）血小板通过前向（fsc）/侧向（ssc）散射特征进行筛选。在单独的直方图中显示了被筛选（r1）的血小板的荧光（fl1）强度。rbc：红细胞。
血小板活化的双色分析：
1、将5 µl特异性或阴性对照抗体与5 µl泛血小板标记物一起加入测定管中。
2、此时，加入小体积（<5 µl）的任何额外的试剂（如抑制剂）。
3、加入26 µl稀释的全血或经洗涤过的血小板（100万），涡旋混匀1-2秒。
在室温下孵育15分钟。加入400 µl pbs停止反应，并在30分钟内进行分析。
小鼠血小板分别与pbs或0.1 u/ml的凝血酶（thrombin）一起与fitc和pe结合的mabs一起孵育。通过gpix或gpiibiiia（fl1; gate 1）的表达对血小板进行了筛选。
二、免疫组织化学（用丙酮固定冷冻切片）
请注意：不建议在（对）甲醛固定的样本上进行免疫组织化学染色，因为大多数大鼠抗体在这些条件下对小鼠组织的效果很差。
1、将冷冻组织的切片放在玻片上，并在4°c下的冰冷100%丙酮中固定20分钟。在室温下干燥一整夜。
2、为了减少试剂的用量，在玻片上的组织切片周围可以用防水笔画一个疏水圈。在所有后续的步骤中，这个圈起来的区域都不应该干燥。因此，建议在潮湿的盒子中进行孵育步骤。
3、在pbs中孵育玻片20分钟。
4、使用过氧化物酶结合的二抗时，将玻片在室温下与0.03%的h2o2孵育10分钟以抑制内源过氧化物酶活性。在pbs中三次洗涤玻片，每次5分钟。
5、用pbs稀释（比例1:10或1:100）的封闭液（二抗体宿主物种的血清），室温下孵育玻片1小时。
6、一抗（2-10 µg/ml）室温孵育2小时。
7、吸取多余液体，然后在pbs中洗涤三次，每次5分钟。
8、用荧光素或过氧化物酶结合的二抗（例如：亲和纯化的驴抗大鼠igg-fitc或hrp）覆盖玻片，按照说明书在封闭液中稀释，室温下孵育1小时。
9、吸取多余液体，pbs洗涤三次，每次5分钟。
10、荧光染色的样本可以直接通过荧光显微镜分析。
11、为了可视化过氧化物酶标记的组织，用新鲜制备的3-氨基-9-乙基咔唑（aec）底物覆盖玻片，并在显微镜下可见红色染色，时间可在5至30分钟之间变化。在橙色背景染色出现之前，用去离子水冲洗停止反应。用伊红染色30-240秒，然后在温水中冲洗玻片20分钟。使用水溶性封装溶液固定切片。
三、免疫沉淀
缓冲液和试剂准备：
pbs/edta：137 mm nacl、2.7 mm kcl、1.5 mm kh2po4、8.0 mm na2hpo4 x 2h2o，ph 7.3；5 mm edta。
ip缓冲液：40 mm tris/hcl、0.3 m nacl、1 mm edta、2 mm pmsf、10 µg/ml leupeptin蛋白酶抑制剂、10 µg/ml aprotinin抑肽酶、1 µg/ml pepstatin胃蛋白酶抑制剂。
igepal非离子表面活性剂：10%的h2o溶液。
2x sds样品缓冲液：10% β-巯基乙醇（用于还原缓冲液）、10% tris缓冲液（1.25 m）、20%甘油、4%sds、0.02%溴酚蓝。
1、将小鼠血小板或细胞在1 ml pbs/edta（5分钟，1300 x g）中洗涤3次，并使用ip缓冲液重悬。
2、加入1% igepal 在室温下溶解血小板（15–20分钟）。
3、10000 x g下离心5分钟去除细胞碎片，并将上清液转移到新的试管中。
4、加入20 µl洗涤过的protein g agarose（pga）。在4°c下混匀孵育至少3小时。
5、3000 x g离心样品5分钟。将上清液转移到新的试管中，以说明书中给定的浓度（通常在2-5 µg/ml之间）加入抗体，30分钟后加入25 µl洗涤过的pga。在4°c下混匀孵育至少2小时，最好过夜。
6、将样品在3000 x g下离心1分钟，向pga中加入1 ml含有1% igepal的1 x ip缓冲液。在3000 x g下离心1分钟。
7、用ip缓冲液中洗涤pga两次（3000 x g离心1分钟）。
8、加入25 µl 1x sds样品缓冲液（还原或非还原），将pga重悬，煮沸5分钟。9、然后将样品冷冻（-20°c）以备日后使用，或者进行sds-page和免疫印迹分析。
四、免疫印迹分析（western blot analysis）
缓冲液和试剂准备：
裂解缓冲液：40mm tris/hcl、0.3 m nacl、1 mm edta、0.05% nan3、1% igepal。
pbs：137 mm nacl、2.7 mm kcl、1.5 mm kh2po4、8.0 mm na2hpo4 x 2h2o，ph 7.3。
5%脱脂牛奶-pbs：含5%脱脂奶粉的pbs。
pbs/t：pbs含0.1%吐温20。
1%脱脂牛奶-pbs/t：含1%脱脂牛奶的pbs/t。
所有步骤都可在室温下进行：
1、在裂解缓冲液中制备小鼠血小板或细胞的裂解物，并与（2x）sds样品缓冲液在95°c下孵育5分钟。
2、根据说明书，在还原或非还原条件下，通过sds聚丙烯酰胺凝胶电泳（sds-page）分离蛋白质，并将蛋白质转移到pvdf膜上。
3、用5%脱脂牛奶封闭膜1小时。
4、加入pbs/t-1%牛奶稀释的一抗（2-5 µg/ml），孵育1小时。
5、用pbs/t冲洗膜两次，30分钟。洗涤程序可以减少到三次，每次10分钟。
6、加入pbs/t-1%牛奶稀释的二抗（hrp偶联的抗大鼠ig），孵育45-60分钟。
7、用pbs/t冲洗膜两次，30分钟。
8、使用ecl（化学发光）显色。
下图为emfret公司授权上海起发在中国区域的代理的授权书。
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货号
产品名称
规格
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r300
antibodies for mouse platelet depletion（现货）
0.5 mg
emfret
m023-2
integrin alphaiibbeta3 (gpiib/iiia, cd41/cd61)（现货）
1.5 ml
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anti - gpibbeta derivative rat igg dylight 488 in vivo platelet labeling
100 μg
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c301
sterile non-immune rat igg（现货）
0.5 mg
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m040-1
gpibalpha (cd42b)（现货）
1.5 ml
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d200
jon/a rat igg2b pe flow cytometry 1 ml
200 tests
emfret
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in vivo mouse platelet labelingclone：anti - gpibbeta derivative isotype：rat igg 标记：dylight 649 appli（现货）
0.1 mg
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m040-2
xia.g5 rat igg2b pe fc（现货）
1.5 ml
emfret
m011-1
jaq1/ rat (wistar) igg2a fitc fc（现货）
1.5 ml
emfret
m130-1
cd62p (p-selectin)
1.5 ml
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m040-3
gpibalpha (cd42b)（现货）
1.5 ml
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m043-0
gpibalpha (cd42b) xia.b2 rat igg2a purif. （现货）
0.5 mg
emfret
m050-1
gpibbeta (cd42c)xia.c3 rat igg2a fitc（现货）
1.5 ml
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m025-1
integrin alphaiibbeta3 (gpiib/iiia, cd41/cd61) leo.f2 rat igg2afitc
1.5 ml
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m042-0
xia g7 rat igg1 purif（现货）
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gpix (cd42a) xia.b4 rat igg1
1.5 ml
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m011-0
gpvi jaq1 rat igg2a purif（现货）
0.1 mg
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m021-1
integrin alphaiibbeta3 (gpiib/iiia, cd41/cd61) leo.h4 rat igg2b
1.5 ml
emfret
m130-2
cd62p (p-selectin) wug.e9 rat igg
1.5 ml
emfret
m050-0
gpibbeta (cd42c) mouse and humanclone：xia.c3 isotype：rat igg2a 标记：purif.
0.5 mg
emfret
m043-1
gpibalpha (cd42b) xia.b2 rat igg2a（现货）
1.5 ml
emfret
m070-1
integrin alpha2 chain (cd49b, gpia) sam.g4 fitc
1.5 ml
emfret
m071-1
integrin alpha2 chain (cd49b, gpia) sam.c1 fitc
1.5 ml
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cd31 (pecam-1) pec.h3 purif.
0.5 mg
emfret
m051-0
purified rat anti-mouse gpix (cd42a)
0.5 mg/ml
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integrin beta3 chain (gpiiia, cd61) luc.a5 rat igg2apurif.
0.5 mg
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integrin alphaiibbeta3 (gpiib/iiia, cd41/cd61)
1.5 ml
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integrin alphaiibbeta3 (gpiib/iiia, cd41/cd61)
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emfret
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