antifix™ 通用抗原修复缓冲液专为福尔马林固定石蜡包埋(ffpe)组织的热诱导表位修复(hier)而设计。该缓冲液使用专有试剂催化ffpe组织中甲醛交联的逆转以恢复抗原反应性。
艾美捷抗原修复液#btm-22030特征:
在中性ph条件下对多种靶标进行出色的抗原修复
简化hier优化
通过使用酪胺扩增的荧光染色进行验证
无毒不易燃
用福尔马林(甲醛)固定组织可以保留组织形态,但甲醛引起的蛋白质交联可以修饰抗体结合位点或表位,因此免疫组织化学无法再检测到它们。传统上,通过使用蛋白酶处理或通过在低ph柠檬酸盐缓冲液或高ph tris缓冲液中加热载玻片来恢复表位反应性。不同表位的最佳去掩蔽方法各不相同,需要针对不同靶标使用多种缓冲液。
antifix™ 通用抗原修复缓冲液经过精心配制,可在中性ph条件下为各种靶标提供出色的热暴露,从而减少对缓冲液优化的需求。它已在使用hrp介导的酪胺信号放大的下一代荧光cf®染料对ffpe组织进行免疫荧光染色时得到验证。
抗原检索方案:
注:ffpe切片应烘焙在带正电的幻灯片上,以避免抗原回收过程中的组织损失
1.使用标准方案对ffpe切片进行除石蜡和再水合。
2.将幻灯片放入coplin罐子或微波炉保险柜内的幻灯片架中
容器注意:微波会导致玻璃罐破裂。集装箱应在使用前测试耐热性。
3.准备1x antifix™ 组合1的通用抗原回收缓冲液体积为10x的缓冲液,含9体积的dh2o并完丨全混合。
4.添加足够的1x antifix™ 缓冲液以完丨全覆盖组织切片。通常,缓冲区被添加到磨砂幻灯片标签的级别。典型的5载玻片的coplin玻璃罐的体积为40 ml,24载玻片的体积为200 ml架子染色皿。
5.加热缓冲区中的幻灯片。使用微波的两种加热方法(a)或下面描述多功能炊具(b)。微波是一种由来已久的技术hier方法。一种带数字温度控制的厨房多功能锅(例如,instant pot®)是微波炉的一种方便的替代品。其他加热hier常用的方法(如热水浴或商业倾斜室)。
注:用于纸巾加工的厨房设备应为专用设备用于研究实验室,根据您的要求贴上生物危害标签机构或地方法规。
a) 使用微波炉:保持载玻片容器未覆盖或松散覆盖以避免压力积聚。用微波炉加热幻灯片,直到缓冲液沸腾了。持续监控集装箱,继续煮10分钟,根据需要每30-60秒停止一次微波炉以防止缓冲液沸腾。煮沸10分钟后,让容器冷却至室温。
b) 使用多功能锅:放置随锅里的炊具。将滑动容器盖松以避免压力积聚。将滑动容器放在支架上,确保其固定安全地避免倾倒。把锅里装满水,使水位达到一半向上滑动容器。关上锅盖,在98°c下加热45分钟没有压力。热处理完成后,小心地移除将容器从锅中的热水中取出,冷却至室温温度
6.用dh2冲洗载玻片3次o完丨全移除缓冲区。
7.根据您的方案进行染色。
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