丁酰胆-碱酯酶(b-che)测定试剂盒的操作过程
(比色法)
一、测定原理:
丁酰胆-碱酯酶水解丁酰胆-碱生成胆-碱及乙酸,胆-碱可以与巯基显色剂反应生成tnb黄色化合物,根据
颜色深浅进行比色定量,水解产物胆-碱的数量可以反应胆-碱酯酶的活力。
二、试剂组成及配制(50t/24样):
试剂一:标准品,粉剂×3支,4℃保存。
1μmol/ml标准品应用液的配制:取标准品一支加生理盐水10ml混匀,现用现配。
试剂二:底物粉剂×2支,用时每支粉剂加生理盐水20ml,现用现配,配好后4℃保存两周。
试剂三:显色剂贮备液,3ml×1支,4℃保存,用时以生理盐水1︰9稀释,配成显色应
用液。需多少配多少,也可以一次配成30ml,避光冷藏。保存期3个月。
试剂四:抑制剂,液体×1支。打开后可以装在空的小塑料瓶内(附空瓶一只),室温保存。
试剂五:透明剂,液体6ml×1支。室温保存。
生理盐水:60ml×2瓶,室温保存。
三、操作过程:
1、样本前处理:
组织样本:准确称取组织重量,按重量(g):体积(ml)=1:9的比例,加入9倍体积的生理盐水,冰水浴条件下
机械匀浆,2500转/分,离心10分钟,取上清,即为10%匀浆上清液;
血清样本:取抗凝全血1000~1500转/分钟,离心10分钟,取上层血浆。也可测血清,测时将血清(浆)
用生理盐水1︰19稀释;
全血样本:取0.1ml抗凝全血加生理盐水至10ml按1︰99稀释,取a ml(一般取0.1ml)检测,每个样本
取样前必须充分混匀。
3、参考取样量:
①、大鼠血清测试前用生理盐水20倍稀释,参考取样量为30~50μl。
②、10%脑组织匀浆的参考取样量为30~50μl。
③、1︰99稀释后的全血稀释液取0.1ml。
五、本法优点:
1、灵敏度高。微量样品即可测出丁酰胆-碱酯酶的水平。
2、可以分型。另有配套试剂盒可测乙酰胆-碱酯酶。
3、方法简便快速,准确稳定。
4、不需气相色谱等高级仪器,只要一般分光光度计即可。
丁酰胆-碱酯酶(b-che)测定试剂盒的操作过程
关键词:分光光度计
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