分光光度计和酶标仪都是光检测仪器,实验室中主要用来测定实验样本的吸光度,虽然它们的功用基本相同,但是两者还是有很大差别的。
其主要差异主要有以下几点:
一、检测波长范围的不同
分光光度计虽与酶标仪一样都使用朗伯-比耳定律进行吸光度测定,但它们的可测光在波长范围上是有所区别。分光光度计主要分为三种:
紫外分光光度计:主要测定波长范围为200-380nm的紫外光区.
可见光分光光度计(或比色计):主要测量波长范围为380~780 nm的可见光区。
荧光分光光度计:主要用于液体、凝胶类的光谱扫描。激发波长扫描范围一般是190~650nm,发射波长扫描范围是200~800nm。可用于液体、固体样品(如凝胶条)的光谱扫描。
红外分光光度计或原子吸收分光光度计适合用于测定2.5~25μm(按波数计为4000cm~400cm)的红外光区。
普通的酶标仪主要通过滤光片来激发光源形成特定的波长.在滤光片轮中使用不同的滤光片可获得不同长度的波长,但波长范围相对较窄。另外酶标仪具有较强紫外吸收能力,所以在300nm以下波长光区不建议使用酶标仪进行含量测定。
二、检测效率不同
酶标仪即酶联免疫检测仪是采用48孔或96孔酶标板即微孔板作为样本容器,可以盛装不同的样本以同时测定吸光度,并能快速地进行吸光度对比。而分光光度计采用的是盛样器皿为比色皿,每次只能测定一种溶液样本,这样增加了实验的重复性,同样也增加了样本及试剂的使用量,测定效率也远远低于酶标仪。
三、光路的方向的不同
由于根据测定样本方式的不同,两者的光路设计也不相同。分光光度计采用的水平光路设计,也就是光线水平通过样本和比色皿,其测定结果不会受到垂直方向因素影响。酶标仪所采用的是垂直光路设计,这样光线可以一次通过所有待测孔。但它的缺点在于容易受到样本溶液液面平整度、待测样本浓度、微孔板的通透性能等因素影响而造成实验数据偏差。
四、光路的长度的不同:
由于样本的吸光系数与样本浓度、光路长度及od值成正比例关系。所以光路的长度也会影响到吸光率。在分光光度计中,由于其光路是水平的,光路长度近似于比色皿的宽度,一般为1厘米左右。而酶标仪的光路长度则取决于样本溶液的液面高度,这就要保证每个孔内的液面高度要一致,如果样本液面的高度参差不齐,也会直接影响实验结果的准确度。
由此可见,吸光度的测定需要根据不同的实验内容去选择对应的仪器设备,有效地扬长避短,这样才能较大程度发挥仪器的功用,从而提高实验效率和准确的实验结果。
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