ELISA 实验常见问题原因分析及解决办法
高背景值？
可能原因是洗板不充分、读数时没有擦拭板底。
解决办法是检查洗板是否按要求进行，读数前擦拭板底，板底有手印或水渍导致值偏高
无信号值？
可能原因是试剂配制错误、标准品溶解后放置时间过久或反复冻融。
解决办法是检查是否存在试剂配制错误，避免溶解后的标准品重复使用，每次实验使用新的标准品
过强的信号值？
可能原因是streptavidin-hrp加样量过高。
解决办法是检查sa-hrp是否按要求的浓度配制
重复性差，可能原因是加样量不均一、加样时需悬空加样，避免划破包被面，引起抗体的损失
标准蛋白反应好，但样本未检测到信号？
可能原因是样本中目标蛋白浓度低、样本基质效应。
解决办法是使用阳性质控品对照测试和重复测试。至少将样本稀释1倍检测，并用回收测试确定基质效应是否消除，选择样本稀释后呈梯度下降的稀释倍数计算结果
标准蛋白反应好，但样本检测信号过高？
原因是样本目标蛋白量过高、样本存在非特异性反应酶。
解决办法是使用稀释液稀释样本，重复测试。选择样本稀释后呈梯度下降的稀释倍数计算结果。使用前确认样本是否存在特殊情况，并处理样本。
读数值过低？
可能原因是读数波长选择错误，显色时间过短。
解决办法是选择正确的主、 次波长读数。显色时间控制在15-25min最佳，不超过30min。
跳孔？
可能原因是洗板中不当操作、加样错误。
解决办法是洗板中不当操作，引起孔间的交叉污染。加样错误造成不符合预期的显色发生。
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