X-α-gal用作酵母双杂交系统中蓝白筛选的筛选标记
x-α-gal用作酵母双杂交系统中蓝白筛选的筛选标记
x-α-gal是酵母半乳糖苷酶（mel1）的显色底物，mel1是gal4酵母双杂交系统的一个报告基因，该基因受gal4调控。mel1编码的分泌型的α-半乳糖苷酶可水解无色的x-α-gal，形成蓝色产物。mel1基因激活后，x-α-gal检测阳性克隆表达的α-半乳糖苷酶，阳性克隆直接在含有x-α-gal的固体培养基上呈蓝色。因此无需裂解细胞，费时费力的检测β-半乳糖苷酶报告基因，只需通过蓝白颜色筛选，即可快速和简便地识别阳性克隆。x-α-gal的用途：1. 用于筛选含x-α-半乳糖苷酶基因的阳性酵母或细菌菌株。在固体培养基上直接检测酵母双杂交相互作用。2. 用于区分肠杆菌科内的不同菌种，以及区分双歧杆菌和乳酸菌3. 在组织化学中用于酶活性的检测。x-gal与x-α-gal不同：x-gal是e.coli β-半乳糖苷酶（lacz）的反应底物，而x-α-gal是酵母α-半乳糖苷酶（mel1）的反应底物。x-α-gal用作酵母双杂交系统中蓝白筛选的筛选标记。
携带mel1基因的酵母菌株：y2hgold、y190、ah190、y187、pg69-2a
操作说明
一、涂布于预制平板：
1）溶解24 mg x-α-gal于6 ml dmf，终浓度为4 mg/ ml。
2）涂布200 μl(15 cm) 或者100 μl（10 cm）x-α-gal 储存液于预制平板上；
3）置于37℃培养箱至液体被吸收（由于dmf挥发性低，最长可放4小时）；
4）将转化细菌或酵母涂于平板上，于37℃或30℃培养直至蓝色菌落出现。
二、直接加入琼脂中：
1）溶解60 mg x-α-gal于3 ml dmf，终浓度为20 mg/ ml。
2）将已灭菌琼脂培养基冷却至50-55℃；
3）向上述培养基中加入20 mg/ ml x-α-gal，比例为每升培养基中加入1 ml x-α-gal溶液。
关键词：培养箱
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一、涂布于预制平板：
1）溶解24 mg x-α-gal于6 ml dmf，终浓度为4 mg/ ml。
2）涂布200 μl(15 cm) 或者100 μl（10 cm）x-α-gal 储存液于预制平板上；
3）置于37℃培养箱至液体被吸收（由于dmf挥发性低，最长可放4小时）；
4）将转化细菌或酵母涂于平板上，于37℃或30℃培养直至蓝色菌落出现。
二、直接加入琼脂中：
1）溶解60 mg x-α-gal于3 ml dmf，终浓度为20 mg/ ml。
2）将已灭菌琼脂培养基冷却至50-55℃；
3）向上述培养基中加入20 mg/ ml x-α-gal，比例为每升培养基中加入1 ml x-α-gal溶液。
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