什么是荧光猝灭?

化合物的荧光可以通过多种过程猝灭(即减少或完*消除),而不会破坏荧光团。荧光猝灭效应导致荧光强度降低。一旦猝灭剂被移除或猝灭机制被“关闭”,原始的荧光强度就会重新出现。猝灭效应导致荧光分子的电子激发态在没有辐射的情况下返回基态,或者阻止实际激发到荧光态。在实践中,荧光猝灭在许多应用中得到利用,因为它是一种易于观察或测量的现象。因此,它是分子水平上发生的过程的指标。例如,分析物的存在或不存在会导致荧光团和猝灭剂之间的距离发生变化,从而导致荧光发生变化。除了荧光强度之外,寿命有时也可以用来衡量这种变化。
分子信标包括所谓的“genepin”、“hairpin”或“分子信标”技术。例如,在这些“智能探针”中,荧光染料和荧光猝灭剂位于单链 dna 的相对两端。由于末端片段上有几个互补碱基,杂交发生在那里,即产生了部分 dna 双链。dna 的中间片段因此形成一个环:所得结构类似于发夹。标记物的荧光现在被猝灭剂的空间接近性猝灭,例如通过 fret 机制。如果现在将与第一条链的碱基序列互补的dna链添加到溶液中,则由于所有碱基更强的相互作用,这两条链会杂交。染料和猝灭剂在空间上分离,导致荧光重新出现。您可以利用这一原理设计许多不同类型的实验并得出有关分子过程的结论。除了使用染料-猝灭剂对之外,还可以使用两种荧光染料,其荧光行为如福斯特共振能量转移中所述。

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