sfre 199,是对m199培养基的改良型,初研发是为了生长和维持培养bak细胞(原代狒狒肾细胞)。sfre 199分为i型和ii型,即sfre 199-1和sfre 199-2。
sfre 199与m199的不同点在于升高了8种氨基酸(*-盐酸、半*、*、l -*、l -*、*、*、*)和葡萄糖的浓度,并加入硫酸锌、丙酮酸钠和*锌胰岛素。另外,还降低了硝酸铁、黄嘌呤和*的浓度。sfre 199-1与sfre 199-2的不同在于,前者含有hank's盐,而后者所含为earle's盐。
sfre-199将m199标准配方中的*增加到150mg/l,半*增至4mg/l,*增至40mg/l,*增至300mg/l,*增至75mg/l,*增至100mg/l,*增至40mg/l,*增至80mg/l,以获得大的细胞生长而未表现出毒性。与加胎牛血清的常规培养基比较,细胞生长速率、产量和蛋白容量均相同。均在移植后第6天单层细胞达到充分融合。
有报道,在sfre 199-1生长的原代bak细胞的群体二倍分裂时间(pdt)约为34.2小时,与加有5%牛血清的hlh(含水解乳白蛋白的hbss)相同,加有3%胎牛血清的m199的pdt为36小时。如果在sfre 199-1中去除胰岛素或硫酸锌,则细胞不能融合,pdt延长。若含有胰岛素和硫酸锌,则其支持生长的能力相当于标准对照血清培养基。
sfre 199培养基中除了葡萄糖,还添加了半乳糖,以避免乳酸过度积累。实验发现,添加的d(+)—半乳糖1000mg/l,可使乳酸合成降低54.5%,在21天的观察期间培养基的ph保持稳定(7.3-7.4)。若培养基ph降到6.8,则培养很难维持。
himedia公司生产的sfre 199培养基不含胰岛素和*,需在使用前单独添加。建议用1n hcl或1n naoh将ph调低理想ph值的0.2-0.3个ph单位,因为过滤会使ph值略微升高。根据需要,还可以无菌添加其他成分,以保证个性培养基的优化。
sfre 199培养基有多种应用。除培养bak细胞外,有报道用不加血清的sfre-199-2培养牛输卵管峡部上皮细胞和壶腹上皮细胞,体外研究牛的受孕过程。也有报道用sfre 199-1无血清培养基培养vero细胞效果较优。而vero细胞常用于狂犬病疫苗,乙脑疫苗等的生产。因此,sfre 199培养基具有*的作为无血清培养基用于疫苗生产的潜力。
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