COLO320 DM人结直肠腺癌细胞传代、复苏技巧
colo320 dm人结直肠腺癌细胞
human colorectal adenocarcinoma cells ,colo 320 dm
货号：yj-h047（str鉴定）
价格： 1500.0
规格： 1*106
细胞特性
1）来源：器官： 结肠 肿瘤分期： dukes氏ｃ型 疾病： 结直肠腺癌
2）形态：半贴壁半悬浮
3）含量：>1x10^6细胞数
4）规格：t25瓶或者1ml冻存管包装
5）用途：仅供科研使用。
运输和保存
干冰运输及复苏好存活细胞
（1）1ml冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。
（2）t25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。
细胞接收后的处理
1）收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将t25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。
2）请在4或5x显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。
3）半贴细胞和贴壁不牢（悬浮）细胞：t25瓶置于37℃培养箱中约2-3h，显微镜下观察细胞的情况，若细胞密度在60%以下，客户需收集t25瓶中的悬浮细胞离心后用完全培养基重悬后打回到原培养瓶中继续培养，若细胞生长70%-90%对细胞进行传代，传代时需要收集培养基中悬浮的细胞离心后回收。
4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议1：2传代 。
一．培养基及培养冻存条件准备
1）准备rpmi-1640（推荐yj-0002）培养基；优质胎牛血清，10%；双抗1%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%dmso，现用现配。
二．细胞处理：
1）冻存细胞的复苏：
将含有1ml细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6ml完全培养基的离心管中混合均匀。在1000rpm条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达70%-90%，即可进行传代培养。
该细胞为悬浮和轻微的贴壁细胞，传代可以参考以下方法：
1. 收集：将培养瓶中的悬浮的细胞收集到离心管中。用不含钙、镁离子的pbs润洗细胞1-2次。由于细胞贴壁不牢pbs润洗后细胞会脱落所以pbs也要回收到离心管中。
2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mm edta于培养瓶中（t25瓶1-2ml，t75瓶2-3ml）置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%fbs的培养基来终止消化。
3. 将收集到的悬浮细胞、pbs清洗液中的细胞和消化下来的贴壁细胞以1000rpml离心5min，弃去上清，补加1-2ml培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1：2的比例分到新t25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
3）细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。
下面t25瓶为例；
1.细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10^6~1×107个活细胞/ml.
2.1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1ml冻存液含1×10^6~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。
将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。
注意事项
1.收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。
2.收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100*，200*各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。
3.由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响，故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态，故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明，期间间隔时间不能大于7天。
4.所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
5.客户在细胞培养过程中，有任何技术问题可以联系技术售后我们随时给予解答。
从2011年开始我们致力于在生命科学领域、生物医学实验外包及论文润色服务，协助客户各类实验服务及论文润色十多年，是您值得信赖的科研合作伙伴!
如果您受时间、试验条件等限制而无法完成您的课题研究，欢迎您与我们联系。
实验代做服务：
免疫组化ihc染色实验服务
细胞、组织tunel凋亡染色实验服务
试剂盒免费代检测
实验室代做实验项目
透射电镜服务实验服务
石蜡/冰冻切片tunel凋亡
核仁组成区嗜银-agnor染色实验服务
免疫共沉淀（chirp）实验
rna结合蛋白免疫沉淀（rip）实验代做
酶联免疫（elisa）技术服务
鸡传染性法氏囊病病毒vp2抗体诊断试剂盒
喹诺酮类快速检测试剂盒
组织芯片/微阵列定制技术服务
染色质免疫沉淀分析(clip)实验服务
多因子液相芯片技术（luminex）实验
免疫细胞化学icc实验服务
atp/adp检测实验服务
蛋白双向(2-d)电泳实验服务
蛋白相互作用分析
碱性磷酸酶染色实验服务
pkc活性检测实验
非标定量实验
（label-free）
dige技术实验服务
端粒酶活性检测实验
细胞生长曲线的测定
扫描电镜服务
nf-kb p65活性检测实验
慢病毒包装实验服务
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规格： 1*106
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1）来源：器官： 结肠 肿瘤分期： dukes氏ｃ型 疾病： 结直肠腺癌
2）形态：半贴壁半悬浮
3）含量：>1x10^6细胞数
4）规格：t25瓶或者1ml冻存管包装
5）用途：仅供科研使用。
运输和保存
干冰运输及复苏好存活细胞
（1）1ml冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。
（2）t25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。
细胞接收后的处理
1）收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将t25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。
2）请在4或5x显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。
3）半贴细胞和贴壁不牢（悬浮）细胞：t25瓶置于37℃培养箱中约2-3h，显微镜下观察细胞的情况，若细胞密度在60%以下，客户需收集t25瓶中的悬浮细胞离心后用完全培养基重悬后打回到原培养瓶中继续培养，若细胞生长70%-90%对细胞进行传代，传代时需要收集培养基中悬浮的细胞离心后回收。
4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议1：2传代 。
一．培养基及培养冻存条件准备
1）准备rpmi-1640（推荐yj-0002）培养基；优质胎牛血清，10%；双抗1%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%dmso，现用现配。
二．细胞处理：
1）冻存细胞的复苏：
将含有1ml细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6ml完全培养基的离心管中混合均匀。在1000rpm条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达70%-90%，即可进行传代培养。
该细胞为悬浮和轻微的贴壁细胞，传代可以参考以下方法：
1. 收集：将培养瓶中的悬浮的细胞收集到离心管中。用不含钙、镁离子的pbs润洗细胞1-2次。由于细胞贴壁不牢pbs润洗后细胞会脱落所以pbs也要回收到离心管中。
2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mm edta于培养瓶中（t25瓶1-2ml，t75瓶2-3ml）置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%fbs的培养基来终止消化。
3. 将收集到的悬浮细胞、pbs清洗液中的细胞和消化下来的贴壁细胞以1000rpml离心5min，弃去上清，补加1-2ml培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1：2的比例分到新t25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
3）细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。
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1.细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10^6~1×107个活细胞/ml.
2.1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1ml冻存液含1×10^6~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。
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注意事项
1.收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。
2.收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100*，200*各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。
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