担心PCR扩增的影响？来看自动化PCR-Free解决方案
常规高通量测序的文库构建，需要pcr扩增。主要是为了对微量dna样本进行扩增，提高库容；另一方面，放大核酸荧光信号，提高测序准确度。然而，pcr扩增同样也有着无法忽视一些问题：
1. 扩增过程中产生复制错误，累积下去，产生假阳性；
2. 扩增会有一定的偏好性，比如gc含量异常的区域和二级结构等区域，扩增效率低，难以覆盖；
3. 扩增的循环数越多，重复率（duplication）越高，造成测序成本增加、浪费测序数据。
什么是pcr-free技术
常规扩增建库有诸多问题，那么pcr-free技术也就营运而生。pcr-free技术，相较于常规建库，其建库步骤为：基因组片段化-末端修复-加接头-纯化-文库质控，省去了pcr扩增的步骤。
1. pcr-free建库技术：
2. 省去扩增步骤，缩短建库时间；
3. 避免使用高保真聚合酶，降低建库成本；
4. 减少扩增产生的复制错误；
5. 避免扩增偏好性；
6. 避免扩增产生的duplication，降低测序成本。
llumina dna pcr-free prep，tagmentation dna建库即运用了pcr-free的建库方式，并同时采用创新型链接在磁珠上的转座酶（blt），将接头连接和dna 片段化结合到一个简单快速的反应中，实现wgs高度均匀的覆盖。
针对pcr-free建库方法，我们推出了基于biomek i7工作站的illumina dna pcr free文库构建自动化方案，该方案可使用低投入量（25-99ng）或标准投入量（100-2000ng）gdna进行建库，同时进行96例样本的建库。
· 减少手动操作时间
· 减少系统设置何潜在的移液错误
· 标准化工作流程改进实验结果
· 快速安装
biomek i7工作站
图1. biomek i7 hybrid genomics workstation工作桌面
· 集成了96通道移液头与灵活8通道移液头；
· 灵活8通道可配置固定针和可替换吸头通道搭配；
· 96通道可选择上一列、一行、多行等不规则形状排列吸头，实现不定样本数液体转移；
· 斜侧抓板机械手可360度旋转，轻松实现台面全覆盖；
· 多达45个工作板位；
· 可实现震荡、加热/冷却、吸头清洗等功能；
· 开放式工作桌面，可轻松整合外部设备，如（自动pcr仪）。
图2. illumina pcr free dna library prep 自动化工作流
使用biomek i7工作站进行 illumina pcr free文库构建，轻松解放双手，把更多的活交给工作站来进行
表1. biomek i7 hybrid genomics workstation自动化illumina pcr free流程预估时间（大于100ng gdna投入）
method options selector (mos）
mos能够选择样本数量、投入量、index开始使用位置，以最大限度地提高灵活性、适应性和方法执行的简易性。
图3. illumina pcr-free建库方法选项选择器
guided labware setup (gls)
gls基于mos中选择的选项生成的，并提供用户特定的图形设置说明，包括试剂体积计算和准备试剂的分步说明。
图4. 引导式实验室设置提供配方注释，指示试剂量（上图），
并指导用户正确设置平台（下图）
deckoptixfinal check (dfc)
在开始运行自动化流程之前，bml中的dfc功能，会通过实时拍照的方式分析工作桌面耗材摆放，以减少设置错误，例如吸头、深孔板摆放位置错误。
实验设计
为了证明在i7双杂交工作站上进行96个样品文库制备的能力，我们从人细胞系na12878 gdna制备文库。将起始浓度为150 ng、300 ng、400 ng、500 ng和750 ng的48个gdna样本以及阴性模板对照（ntc）随机放入96孔板，如下所示。
实验结果
· 随机挑取了23个 gdna文库进行测序，平均插入片段为483bp±28bp
· reads mapping率为96.8%，标准偏差为0.1%
biomek i7工作站上的illumina pcr free dna文库制备自动化是一个独立的解决方案，为任何规模的实验室提供了高效、灵活和可扩展的解决方案。自动化解决方案提供的文库在下游工作流程中产生高质量的结果，并节省了宝贵的时间和金钱。
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2. 扩增会有一定的偏好性，比如gc含量异常的区域和二级结构等区域，扩增效率低，难以覆盖；
3. 扩增的循环数越多，重复率（duplication）越高，造成测序成本增加、浪费测序数据。
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常规扩增建库有诸多问题，那么pcr-free技术也就营运而生。pcr-free技术，相较于常规建库，其建库步骤为：基因组片段化-末端修复-加接头-纯化-文库质控，省去了pcr扩增的步骤。
1. pcr-free建库技术：
2. 省去扩增步骤，缩短建库时间；
3. 避免使用高保真聚合酶，降低建库成本；
4. 减少扩增产生的复制错误；
5. 避免扩增偏好性；
6. 避免扩增产生的duplication，降低测序成本。
llumina dna pcr-free prep，tagmentation dna建库即运用了pcr-free的建库方式，并同时采用创新型链接在磁珠上的转座酶（blt），将接头连接和dna 片段化结合到一个简单快速的反应中，实现wgs高度均匀的覆盖。
针对pcr-free建库方法，我们推出了基于biomek i7工作站的illumina dna pcr free文库构建自动化方案，该方案可使用低投入量（25-99ng）或标准投入量（100-2000ng）gdna进行建库，同时进行96例样本的建库。
· 减少手动操作时间
· 减少系统设置何潜在的移液错误
· 标准化工作流程改进实验结果
· 快速安装
biomek i7工作站
图1. biomek i7 hybrid genomics workstation工作桌面
· 集成了96通道移液头与灵活8通道移液头；
· 灵活8通道可配置固定针和可替换吸头通道搭配；
· 96通道可选择上一列、一行、多行等不规则形状排列吸头，实现不定样本数液体转移；
· 斜侧抓板机械手可360度旋转，轻松实现台面全覆盖；
· 多达45个工作板位；
· 可实现震荡、加热/冷却、吸头清洗等功能；
· 开放式工作桌面，可轻松整合外部设备，如（自动pcr仪）。
图2. illumina pcr free dna library prep 自动化工作流
使用biomek i7工作站进行 illumina pcr free文库构建，轻松解放双手，把更多的活交给工作站来进行
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method options selector (mos）
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图3. illumina pcr-free建库方法选项选择器
guided labware setup (gls)
gls基于mos中选择的选项生成的，并提供用户特定的图形设置说明，包括试剂体积计算和准备试剂的分步说明。
图4. 引导式实验室设置提供配方注释，指示试剂量（上图），
并指导用户正确设置平台（下图）
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在开始运行自动化流程之前，bml中的dfc功能，会通过实时拍照的方式分析工作桌面耗材摆放，以减少设置错误，例如吸头、深孔板摆放位置错误。
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为了证明在i7双杂交工作站上进行96个样品文库制备的能力，我们从人细胞系na12878 gdna制备文库。将起始浓度为150 ng、300 ng、400 ng、500 ng和750 ng的48个gdna样本以及阴性模板对照（ntc）随机放入96孔板，如下所示。
实验结果
· 随机挑取了23个 gdna文库进行测序，平均插入片段为483bp±28bp
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