古朵生物：常用的检测核酸的方法
picogreen是一种极为灵敏的荧光核酸染料，常用于双链dna的定量检测。历来dna浓度的测定在cdna文库的构建，dna亚克隆、pcr产物的估测等领域中具有重要意义。疫苗等生物制品中残留微量dna的检测更是直接关系到人类的健康。
常用的检测核酸的方法有:
1）紫外吸光法（a260），该法操作简便，但dna样品中核苷酸、单链dna、rna和蛋白质对紫外吸收信号影响很大，还容易受到核酸样品中污染物的干扰，不能区分dna和rna，而且灵敏度低（δa260=0.1相当于5ug/ml的dsdna）；
2）探针杂交法，该法是传统检测微量dna的常用方法，基本能满足目前疫苗和治疗性生物制品的检测需求，但是该法耗时较长，操作繁琐，稳定性、敏感性和特异性较差；
3）hoechst33258染料法，hoechst33258是一种一定程度上特异于双链dna的核酸染料，基本不受蛋白质的干扰，可以检测低至10ng/ml的dna；在检测稳定性和灵敏度上仍达不到理想效果。
picogreen dsdna定量法：picogreen仅在与dna双链结合后才发出荧光，且所产生的荧光与dna浓度呈正比，在存在ssdna、rna和单体核苷酸的条件下，可以选择性地检测低至25pg/ml的dsdna。该分析在三个数量级范围内呈线性，且几乎无序列依赖性，可以精确地测量多个来源的dna，包括基因组dna、病毒dna、小量提取dna或pcr扩增产物。
相比传统的方法，picogreen dsdna quantitation reagent定量具有以下优势：
①灵敏度高：数量级较uv吸光读数更敏感，可节省宝贵的样品；
②特异性强：在等摩尔的rna存在的条件下，对dsdna具有特异性；
③耐受性好：耐受较高浓度的盐、尿素、乙醇、lv仿、去垢剂、蛋白或琼脂糖，可以直接定量pcr扩增产物而无需从反应混合物中纯化dna。
④易于使用——只需在样品中加入染料，等待5分钟，然后读数即可，且适用于96和384孔板；与大多数基于荧光的酶标仪和荧光计兼容。
⑤适用范围广：可适用于pcr的分析、芯片样品、dna损伤分析、酶活性分析、基因组dna定量以及复杂混合物中dsdna的检测和病毒dna定量等多种领域。
若每次分析体积为2 ml，1ml picogreen定量试剂足够200次分析使用，若使用微孔板或96孔板检测，每次使用量200μl，则足够2000次分析。另外，我公司提供【双链dna（dsdna）定量检测试剂盒】方便客户选用。
储存条件：4℃避光干燥，有效期6个月。
注意事项：
1）picogreen定量试剂含有dmso（已知有毒试剂），请小心操作；
2）尽管目前尚未有数据表明picogreen具有诱变性和毒性，但是该试剂能结合双链dna，请操作时务必小心。
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2）探针杂交法，该法是传统检测微量dna的常用方法，基本能满足目前疫苗和治疗性生物制品的检测需求，但是该法耗时较长，操作繁琐，稳定性、敏感性和特异性较差；
3）hoechst33258染料法，hoechst33258是一种一定程度上特异于双链dna的核酸染料，基本不受蛋白质的干扰，可以检测低至10ng/ml的dna；在检测稳定性和灵敏度上仍达不到理想效果。
picogreen dsdna定量法：picogreen仅在与dna双链结合后才发出荧光，且所产生的荧光与dna浓度呈正比，在存在ssdna、rna和单体核苷酸的条件下，可以选择性地检测低至25pg/ml的dsdna。该分析在三个数量级范围内呈线性，且几乎无序列依赖性，可以精确地测量多个来源的dna，包括基因组dna、病毒dna、小量提取dna或pcr扩增产物。
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①灵敏度高：数量级较uv吸光读数更敏感，可节省宝贵的样品；
②特异性强：在等摩尔的rna存在的条件下，对dsdna具有特异性；
③耐受性好：耐受较高浓度的盐、尿素、乙醇、lv仿、去垢剂、蛋白或琼脂糖，可以直接定量pcr扩增产物而无需从反应混合物中纯化dna。
④易于使用——只需在样品中加入染料，等待5分钟，然后读数即可，且适用于96和384孔板；与大多数基于荧光的酶标仪和荧光计兼容。
⑤适用范围广：可适用于pcr的分析、芯片样品、dna损伤分析、酶活性分析、基因组dna定量以及复杂混合物中dsdna的检测和病毒dna定量等多种领域。
若每次分析体积为2 ml，1ml picogreen定量试剂足够200次分析使用，若使用微孔板或96孔板检测，每次使用量200μl，则足够2000次分析。另外，我公司提供【双链dna（dsdna）定量检测试剂盒】方便客户选用。
储存条件：4℃避光干燥，有效期6个月。
注意事项：
1）picogreen定量试剂含有dmso（已知有毒试剂），请小心操作；
2）尽管目前尚未有数据表明picogreen具有诱变性和毒性，但是该试剂能结合双链dna，请操作时务必小心。
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