质粒的一般实验步骤
质粒是使用广泛的基因操作工具，可以进行编码基因、microrna、lncrna的功能研究、启动子活性、转录因子及3’utr调控研究等。实验步骤：
1)质粒提取
1.10,0001min离心收集1.5-5ml菌液沉淀于1.5ml离心管中
2.加入100溶液1，振荡至悬浮
3.加入200溶液2，立即轻柔颠側离心管6次，使菌体充分裂解，随后将离心管冰上放置3分钟
4.加入150山溶液3，立即温和颠倒离心管数次，冰上放置3分钟，10,00g离心10mins
5.将步骤4的上清转移至新的离心管(尽量去除杂质)，加入等体积的苯酚/氖仿/异成醇混
合均匀10,000离心5min
6.将步骤5的上清转移至新的离心管，加入2倍体积的无水乙醇，室温放置5-1omin，沉
降dna
7.10000g离心10分钟，弃乙醇，保留沉淀，加入1ml706的乙醇洗涤沉淀，10,000离心5分钟
8.倒掉乙醇溶液，用吸水纸吸净管壁上的水珠，室温蒸发痕量乙醇
9.加入适量含rnase的te或灭菌双蒸水溶解质粒dna
2）质粒鉴定琼脂糖礙胶电泳
灌胶：胶中加入芡光染料< sybr green)
加样：质粒+上样緩冲液→混匀
电泳
结果观察：uv灯下
实验分析：
裂解细胞中除含有质粒dna外，还含有基因组dna、各种rna、蛋白质和脂类等物质，因
用碱裂解法除去杂质
1、防止dna裂解: solution1
1)、所含糖增加溶洨黏度，維持渗透压，防止dna受机械剪切作用降解
2)、所含edta抑制酶活性
2、溶解与变性：solution2
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