间充质干细胞鉴定手册
间充质干细胞（mesenchymal stem cells，mscs）是来源于中胚层的多能成体干细胞，广泛存在于脐带、骨髓、脂肪、牙髓、月经血等组织，体外培养可分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞等多种类型的细胞。
图1 the mesengenic process（图片来源于文献，仅供学习参考用）
mscs具有自我更新能力和多向分化潜能，能够释放出许多具有抗凋亡、免疫调节、促血管生成等功能的生物活性因子，可刺激组织器官再生，并且低水平表达主要组织相容性复合体（mhc）ⅰ类分子，不表达mhc-ⅱ类分子，不易激活t细胞的免疫反应，具有低免疫原性。这些特点和功能使mscs成为细胞治疗的选择，美国临床信息公示数据库显示，截止今年9月份，共有1583项mscs的临床实验，研究主要集中于心血管疾病、骨关节损伤、自身免疫性疾病等。
图2 mscs研究者分布和mscs研究热点
随着mscs的研究如火如荼，不同的分离方法、营养体系随之而来，如何评判不同分离方法的mscs获得率成为了一个难题，为了解决这个问题，2006年，国际细胞治疗学会的间充质和组织干细胞委员会提出了定义人类mscs的标准。
1、mscs在标准培养条件下必须具有塑料粘附性
mscs具有异质性，不同物种，不同组织来源大小有所差异，例如猫脂肪来源mscs脐带来源mscs小，所以无法单一的从外观判定mscs，但是几乎所有的mscs都是贴壁生长，具有较强的贴壁能力，多数mscs呈纤维细胞样生长，呈梭形或不规则三角形，胞质向外伸出突起。传代后细胞呈旋涡状排列生长。
图3 人骨髓间充质干细胞（图片来源于网络，仅供学习参考用）
2、特异性表面抗原（ag）的表达
通过流式细胞术测量，95%的mscs群体必须表达cd105、cd73和cd90。此外，这些细胞必须缺乏cd45、cd34、cd14或cd11b、cd79a或cd19和hla ii类的表达（5/2%阳性）。
表1 mscs特异性表面抗原的表达指标
phenotype
positive (≥95%)
negative (≤2%)
cd105
cd45
cd73
cd34
cd90
cd14或cd11b
cd79a或cd19
hla ii
3、在体外具有分化为成骨细胞、脂肪细胞和成软骨细胞的能力
三系分化能力是mscs特别的鉴定mscs的方法，向成骨细胞的分化可以通过用茜素红染色或von kossa染色来证明，向脂肪细胞分化最容易通过油红o染色来证明，成软骨细胞分化通过阿利辛蓝或免疫组织化学染色来证明。
图4 人mscs成骨分化诱导 abs9453
图5 人mscs成脂分化诱导 abs9454
图6 人mscs成软骨分化诱导 abs9455
三系分化小问答：
1、如何解决成骨分化后细胞极易脱壁的现象？
1）试剂盒内含有包被液，可在铺板前使用；
2）分化时细胞汇合度不易过高，请按照说明书指示；
3）多孔样品换液时应尽量分批迅速，避免细胞表面干涸，加液时手法轻柔，不能直接冲击皿底，换液时培养基必须复温；
4）诱导过程中更换培养液时不要清洗，诱导结束后清洗时一定要轻柔，避免剧烈晃动。
2、成脂分化时细胞形态变差？
1）成脂时细胞汇合度一定要达到90%左右；
2）若用诱导培养基b时发现细胞状态变差，可以根据具体情况提前更换为诱导培养基c；
3）诱导过程中无需清洗，诱导结束后清洗时一定要轻柔，避免剧烈晃动。
3、成软骨诱导后软骨球不悬浮或者软骨球碎裂？
1）细胞成软骨诱导离心时，推荐220g离心5min，具体情况可以调整，以细胞聚团为准，离心力过大软骨球不易悬浮，过小软骨球表面易分散；
2）诱导后24 小时内避免摇动细胞沉淀，以确保形成个团块。离心管需使用聚丙烯材质无菌管；
3）注意开关培养箱门时动作要轻柔，不要震动。
4、软骨球是否可以做冰冻切片？
可以，做冰冻切片时固定后可以用蔗糖梯度脱水，若不及时切片染色，需用铝箔纸包裹，保存在-80℃。
mscs鉴定相关的讲解就到这里啦，老师们有细胞培养相关问题，欢迎公众号“爱必信生物”后台留言。
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货号
产品名称
规格
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xeno-free人间充质干细胞培养基（无酚红）
1kit
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xeno-free人间充质干细胞培养基
1kit
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无外泌体胎牛血清
50ml
abs9453
人间充质干细胞成骨诱导试剂盒
100ml
abs9454
人间充质干细胞成脂诱导试剂盒
100ml
abs9455
人间充质干细胞成软骨诱导试剂盒
100ml
abs9478
无血清细胞冻存液plus
100ml
abs9411
细胞消化液
100ml
abs60263
外泌体rna提取试剂盒
50t
abs9587
外泌体专用裂解液
20ml
abs60364
外泌体dna提取试剂盒
50t
abs50040
细胞上清外泌体提取试剂盒
20t
参考文献
[1] dominici m, le blanc k, mueller i, et al. minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells. the international society for cellular therapy position statement[j]. cytotherapy, 2006, 8(4): 315-317.
[2] caplan a i, correa d. the msc: an injury drugstore[j]. cell stem cell, 2011, 9(1): 11-15.
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wb相关：ecl发光液、预染marker、预制胶；ihc相关：二抗试剂盒、组化笔；ip/coip试剂盒；激动剂/抑制剂；血清、bsa、蛋白酶k、ctb、ttx、cee；凋亡试剂盒；呼吸爆发试剂盒；elisa试剂盒；重组蛋白；抗体: 二抗、标签抗体、对照抗体；定制服务(抗体/多肽/蛋白/标记/检测)...
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1、mscs在标准培养条件下必须具有塑料粘附性
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positive (≥95%)
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3、在体外具有分化为成骨细胞、脂肪细胞和成软骨细胞的能力
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1、如何解决成骨分化后细胞极易脱壁的现象？
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2、成脂分化时细胞形态变差？
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2）若用诱导培养基b时发现细胞状态变差，可以根据具体情况提前更换为诱导培养基c；
3）诱导过程中无需清洗，诱导结束后清洗时一定要轻柔，避免剧烈晃动。
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