你知道dna的浓度和纯度的检测方法有什么吗?让我们一起来看看吧!目前常用紫外分光光度法检测核酸的浓度及纯度。
一、检测原理
紫外分光光度法基于dna链上碱基的苯环结构在紫光区具有较强吸收,dna/rna在260nm处有最大的吸收峰,蛋白质在280nm处有最大的吸收峰,盐和小分子则集中在230nm处。因此,可以用260nm波长进行分光测定核酸浓度,od值为1相当于大约50ug/ml双链dna,单链dna浓度约为33ug/ml,rna约为40ug/ml,寡核苷酸约为35ug/ml。如用h,o稀释dna/rna样品n倍并以h,o为空白对照,根据此时读出的od260值即可计算出样品稀释前的浓度
二、dna纯度比值
dna 纯度比值是表示dna样本中 dna 的相对浓度的指标,它是通过测量样本中不同物质的含量来计算的。a280nm是蛋白和酚类物质最高吸收峰的吸收波长,纯dna的a260/a280比值为1.8,纯rna为2.0。假如比值低,表示受到蛋白(芳香族)或分类物质的污染,需要纯化样品。比值=1.5相当于50%蛋白质/dna溶液。a230nm是碳水化合物最高吸收峰的吸收波长,纯dna和rna的a260/a230比值为2.5。若比值小于2.0标明样品被碳水化合物(糖类)、盐类或有机溶剂污染,需要纯化样品。
三、dna纯度比值可能受到以下因素的影响
1.样本收集和存储方法:样本在收集和存储过程中可能会受到污染,影响dna纯度。
2.dna 提取方法:不同的dna提取方法可能导致dna纯度的不同。
3.生物样本的特性:不同的生物样本中的dna含量和组成也可能导致dna纯度的不同。
4.纯化步骤:在纯化dna时,不同的纯化方法和操作步骤可能对dna纯度产生影响。
5.测量方法:不同的测量方法可能产生不同的dna纯度比值。
因此,为了确保dna纯度的准确性,需要在每个步骤中注意控制可能影响dna纯度的因素,并使用适当的方法和技术进行测量。
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