出口水果中氯吡脲（比效隆）残留量的检测方法SN/T 3643-2013
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
sn/t 3643-2013
出口水果中氯吡脲（比效隆）残留量的检测方法
液相色谱-串联质谱法
1范围
本标准规定了出口水果中氯吡脲（比效隆）残留量的液相色谱-串联质谱检测方法。
本标准适用于葡萄、猕猴桃、西瓜、梨、柑桔、菜果等水果中氯吡脲（比效隆）残留量的测定和确证。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不ke少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
gb/t6682分析实验室用水规格和实验方法
3方法提要
试样中残留的氯吡脲用乙腈提取，提取液经n-丙基乙二胺（psa）和c18填料分散固相萃取净化后，液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。
4试剂和材料
除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为gb/t 6682规定的一级水。
4.1乙腈：农残级。
4.2甲醇：农残级。
4.3乙酸铵。
4.4氯化钠。
4.5 5mmol/l乙酸铵水溶液：称取0.385g乙酸铵（4.3），溶解于1000ml水中。
4.6甲醇-水溶液（60+40，体积比）：准确量取60ml甲醇租40ml水，混合后备用。
4.7氯吡脲（比效隆）标准物质（forchlorfenuron，cas号68157-60-8，c12h10cin3o）：纯度大于或等于99%。
4.8氯吡脲标准储备溶液：准确称取适量的氯吡脲标准物质（4.7），用甲醇配制成浓度为100μg/ml的标准储备溶液，-18℃冰箱中保存。
4.9氯吡脲标准中间溶液：准确吸取适量的氯吡脲标准储备溶液（4.8），用甲醇配制成浓度为10μg/ml的标准中间溶液，0℃~4℃冰箱中保存。
4.10空白样品基质溶液：选取不含待测物的样品，按照步骤7.1和7.2操作，得到空白样品基质溶液。
4.11氯吡脲标准基质溶液：根据需要使用前吸取适量的氯吡脲标准中间溶液（4.9），用空白样品基质溶液（4.10）配制成适当浓度的标准基质溶液，0℃~4℃冰箱中保存，使用前配制。
4.12无水硫酸镁：使用前在500℃灼烧5h，取出，在干燥器中冷却至室温，贮于密封瓶中备用。
4.13n-丙基乙二胺（psa）填料：50μm，8.4% c，3.3% n，或相当者。
4.14c18填料：40μm~63μm，或相当者。
4.15微孔过滤膜（尼龙）：有机系，13 mm×0.22μm。
5仪器与设备
5.1液相色谱-串联质谱仪：配备电喷雾离子源（esi）。
5.2天平：感量0.1mg和0.01 g。
5.3食品粉碎机。
5.4匀浆机：转速不低于12000 r/min。
5.5涡旋混合器。
5.6离心机：转速不低于4 000 r/min。
5.7旋转蒸发器。
5.8氮吹仪。
5.9聚丙烯离心管：50ml。
5.10离心管：10ml。
6试样制备与保存
取水果样品500g，取可食部分，将其切碎，充分混匀后放入食品粉碎机中粉碎，制成待测试样，标明标记。放入分装容器中，于-18℃密封保存，备用。
7测定步骤
7.1提取
准确称取试样10 g（精确到0.01 g）于50ml离心管中，准确加入20ml乙腈，用匀浆机在12000 r/min高速匀浆1 min，加入1 g氯化钠，将离心管置于冷水浴中冷却，缓慢加入6 g无水硫酸镁，振荡，于4 000 r/min离心3 min。
7.2净化
分别加入100mg psa填料、100mg c18填料和100mg无水硫酸镁于10ml离心管中，移取2ml上清液于该离心管中，在涡旋混合器上涡旋1min后，4000r/min离心3min。准确移取1ml上清液于一支干净的离心管中，用氮气吹干，甲醇-水溶液（60+40，体积比）（4.6）溶解并定容至1.0ml，过滤膜（4.15），供液相色谱-串联质谱仪测定和确证。
7.3测定
7.3. 1液相色谱参考条件
液相色谱条件如下：
a）色谱柱：c18柱，150 mm×2.1 mm（内径），5μm，或相当者；
b）柱温：30℃；
c）流速：0.25ml/min；
d）进样量：10μl；
e）流动相及梯度洗脱条件见表1。
7.3.2质谱参考条件
质谱条件如下：
a）电离方式：电喷雾电离（esi）；
b）扫描方式：正离子扫描；
c）检测方式：多反应监测（mrm）；
d）电喷雾电压：4.0 kv；
e）鞘气、辅助气均为高纯氮气，碰撞气为高纯氩气。使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求，参考条件参见附录a；
f）监测离子对（m/z）：氯吡脲247.9/129.0（定量离子）、247.9/93.1。
7.3.3液相色谱-串联质谱检测及确证
根据试样中被测样液的含量情况，选取待测物的响应值在仪器线性响应范围内的浓度进行测定，如果超出仪器线性响应范围应进行稀释。在上述色谱条件下氯吡脲的参考保留时间约为6.2min，标准溶液的选择性离子流图参见附录b。按照液相色谱-串联质谱条件测定样品和标准工作溶液，样品中待测物质的保留时间与标准溶液中待测物质的保留时间偏差在±2.5%之内。定量测定时采用标准曲线法。定性时应当与浓度相当标准工作溶液的相对丰度一致。相对丰度允许偏差不超过表2规定的范围，则可以判断样品中存在对应的被测物。
7.4空白试验
除不称取试样外，均按上述步骤进行。
7.5结果计算和表述
用色谱数据处理软件或按式（1）计算试样中氯吡脲残留量，计算结果需扣除空白值：
式中：
x——试样中氯吡脲的残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）；
c——从标准曲线上得到的氯吡脲溶液浓度，单位为微克每毫升（μg/ml）；
v——样液最终定容体积，单位为毫升（ml）；
m——最终样液所代表的试样质量，单位为克（g）。
注：计算结果应扣除空白值。
8测定低限和回收率
8.1测定低限
本方法的测定低限为0.01mg/kg。
8.2添加浓度范围及回收率
本方法添加浓度及回收率的实验数据参见表3。
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2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不ke少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
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3方法提要
试样中残留的氯吡脲用乙腈提取，提取液经n-丙基乙二胺（psa）和c18填料分散固相萃取净化后，液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。
4试剂和材料
除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为gb/t 6682规定的一级水。
4.1乙腈：农残级。
4.2甲醇：农残级。
4.3乙酸铵。
4.4氯化钠。
4.5 5mmol/l乙酸铵水溶液：称取0.385g乙酸铵（4.3），溶解于1000ml水中。
4.6甲醇-水溶液（60+40，体积比）：准确量取60ml甲醇租40ml水，混合后备用。
4.7氯吡脲（比效隆）标准物质（forchlorfenuron，cas号68157-60-8，c12h10cin3o）：纯度大于或等于99%。
4.8氯吡脲标准储备溶液：准确称取适量的氯吡脲标准物质（4.7），用甲醇配制成浓度为100μg/ml的标准储备溶液，-18℃冰箱中保存。
4.9氯吡脲标准中间溶液：准确吸取适量的氯吡脲标准储备溶液（4.8），用甲醇配制成浓度为10μg/ml的标准中间溶液，0℃~4℃冰箱中保存。
4.10空白样品基质溶液：选取不含待测物的样品，按照步骤7.1和7.2操作，得到空白样品基质溶液。
4.11氯吡脲标准基质溶液：根据需要使用前吸取适量的氯吡脲标准中间溶液（4.9），用空白样品基质溶液（4.10）配制成适当浓度的标准基质溶液，0℃~4℃冰箱中保存，使用前配制。
4.12无水硫酸镁：使用前在500℃灼烧5h，取出，在干燥器中冷却至室温，贮于密封瓶中备用。
4.13n-丙基乙二胺（psa）填料：50μm，8.4% c，3.3% n，或相当者。
4.14c18填料：40μm~63μm，或相当者。
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5.2天平：感量0.1mg和0.01 g。
5.3食品粉碎机。
5.4匀浆机：转速不低于12000 r/min。
5.5涡旋混合器。
5.6离心机：转速不低于4 000 r/min。
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5.10离心管：10ml。
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f）监测离子对（m/z）：氯吡脲247.9/129.0（定量离子）、247.9/93.1。
7.3.3液相色谱-串联质谱检测及确证
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7.5结果计算和表述
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式中：
x——试样中氯吡脲的残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）；
c——从标准曲线上得到的氯吡脲溶液浓度，单位为微克每毫升（μg/ml）；
v——样液最终定容体积，单位为毫升（ml）；
m——最终样液所代表的试样质量，单位为克（g）。
注：计算结果应扣除空白值。
8测定低限和回收率
8.1测定低限
本方法的测定低限为0.01mg/kg。
8.2添加浓度范围及回收率
本方法添加浓度及回收率的实验数据参见表3。
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