mrna合成的关键步骤之一是将质粒dna进行线性化,这一步需要使用限制性内切酶,iis型内切酶是质粒线性化的内切酶,因为它们在识别位点下游切割dna,可确保所设计的poly(a)尾的完整性,线性化后的dna模板上不会留下“疤痕”,ivt过程中也不会添加不需要的核苷酸。bsai是常见的iis型内切酶之一,在mrna合作中起着重要作用。
图1. bsai识别位点及切割序列
翌圣gmp级别bsai翌圣的bsai由大肠杆菌重组表达,gmp标准生产,酶切效率高、星号活性低、末端完整性良好,可用于mrna疫苗生产的质粒线性化、慢病毒/腺病毒包装的载体构建、质粒制备的酶切验证、golden gate组装等。
产品特点
1、完成fda dmf备案(备案号:mf038306)2、gmp级别,无动物源成分,严格质控严格按照gmp标准生产,确保无动物源成分引入。核酸酶,蛋白酶、宿主dna/蛋白残留、支原体、内毒素等均严格质控确保产品质量。
3、高酶切效率,低星号活性,末端完整性良好具有高酶切效率,37℃反应16 h无星号活性,经酶切—连接—再酶切测试末端完整性良好。
4、性能优越,应用端性能媲美竞品
部分数据展示01无非特异性核酸酶残留将20 u bsai与底物dna在37℃孵育 1 h和16 h,琼脂糖凝胶电泳比较dna谱带变化。结果显示翌圣bsai无非特异性核酸酶残留。
图2.非特异性核酸酶残留检测结果
02末端完整性良好,与进口品牌效果一致通过“酶切—连接—再酶切”的功能实验验证bsai酶切的末端完整性,结果显示翌圣的bsai末端完整性良好,与进口品牌效果一致。
图3. bsai末端完整性检测结果
03末端完整性良好,与进口品牌效果一致在37℃下,将bsai及底物dna在酶切反应体系中共同孵育16h,未检测到星号活性引起的底物非特异性降解,表明翌圣bsai 16 h孵育无星号活性。
图4. bsai星号活性检测结果
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