快速内切酶XhoI使用方法说明
快速内切酶xhoi背景：
flycut™ 酶是一系列能够快速消化dna的工程限制性酶。所有flycut™酶在通用cutone中显示出优异的活性™ 和cutone™ 彩色缓冲液，能够在5~15分钟内消化dna。这使得任何限制性酶的组合都能在一个反应管中同时工作，并消除了连续消化的需要。flycut™ 酶已通过多项严格的质量控制，可用于消化质粒、基因组和病毒dna以及pcr产物。cutone™color buffer包括密度试剂以及红色和黄色跟踪染料，可以将反应混合物直接装载在凝胶上。cutone的红色染料™ 彩色缓冲液在1%琼脂糖凝胶中与2.5kb双链dna片段一起迁移，黄色染料在1%琼脂凝胶中与10bp双链dna碎片一起迁移。
艾美捷快速内切酶xhoi：
cat #: c-bsm583
size: 500 rxns
storage: -20°c
快速内切酶xhoi组成：
推荐反应条件：
1x cutone“缓冲液；在37°c下培养；有关反应设置，请参阅“快速dna消化方案”。
热灭活
在80°c下培养20分钟。
质量控制：
功能测试
a20μl在含有1μgλdna（hindli消化物）和1μl flycut’’xhol的cutone“缓冲液中的反应在37℃下孵育15分钟，通过琼脂糖凝胶电泳确定完-全消化。
长时间培养/星形活性测定
在含有1μgλdna（hindli消化物）和1μl flycut“”xhol的cutone“”缓冲液中，在37℃下孵育3小时，20μl反应产生琼脂糖凝胶电泳测定的无可检测核酸酶降解的dna模式。较长的孵化时间可能导致恒星活动。
结扎和清算
在37℃下用flycut“”xhol消化10倍后，>95%的dna片段可以在22℃下与t4 dna配体连接。在这些连接的片段中，通过琼脂糖凝胶电泳测定，>95%可以用flycut“xhol重新切割。
非特异性核酸内切酶活性
在含有1μg超螺旋质粒和1μl flycut“”xhol的cutone“”缓冲液中进行20μl反应，在37℃下培养4小时，通过琼脂糖凝胶电泳测定，转化为刻痕或线性形式的转化率<10%。
蓝/白筛选试验：
用1μl flycut消化含有laczα基因的合适载体™xhoi。将消化产物连接并转化为大肠杆菌感受态细胞。在含有x-gal、iptg和适当抗生素的luria bertani培养板上，成功连接的β-半乳糖苷酶基因可以表达并产生蓝色菌落，而中断基因（即降解的dna末端）产生白色菌落。flycut™ 限制性内切酶必须产生少于1%的白色菌落。
使用方法：
1.快速dna消化方案
① 按照指示的顺序在冰上混合反应组分
② 轻轻搅拌并向下旋转；
③在37°c下培养15分钟（质粒dna）或15～30分钟（pcr产物）或30～60分钟（基因组dna）；
④ 可选：在80°c下加热20分钟使酶失活；
⑤如果cutone™ 在反应中使用颜色缓冲液，将反应混合物的等分试样直接装入凝胶中。
2.dna的双重和多重消化
①每种酶使用1μl，并适当扩大反应条件；
②反应混合物中酶的总体积不应超过总反应体积的1/10；
③如果酶需要不同的反应温度，从需要较低温度的酶开始，然后加入第二种酶并在较高温度下孵育。
3.扩大质粒dna消化反应
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在含有1μgλdna（hindli消化物）和1μl flycut“”xhol的cutone“”缓冲液中，在37℃下孵育3小时，20μl反应产生琼脂糖凝胶电泳测定的无可检测核酸酶降解的dna模式。较长的孵化时间可能导致恒星活动。
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在含有1μg超螺旋质粒和1μl flycut“”xhol的cutone“”缓冲液中进行20μl反应，在37℃下培养4小时，通过琼脂糖凝胶电泳测定，转化为刻痕或线性形式的转化率<10%。
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用1μl flycut消化含有laczα基因的合适载体™xhoi。将消化产物连接并转化为大肠杆菌感受态细胞。在含有x-gal、iptg和适当抗生素的luria bertani培养板上，成功连接的β-半乳糖苷酶基因可以表达并产生蓝色菌落，而中断基因（即降解的dna末端）产生白色菌落。flycut™ 限制性内切酶必须产生少于1%的白色菌落。
使用方法：
1.快速dna消化方案
① 按照指示的顺序在冰上混合反应组分
② 轻轻搅拌并向下旋转；
③在37°c下培养15分钟（质粒dna）或15～30分钟（pcr产物）或30～60分钟（基因组dna）；
④ 可选：在80°c下加热20分钟使酶失活；
⑤如果cutone™ 在反应中使用颜色缓冲液，将反应混合物的等分试样直接装入凝胶中。
2.dna的双重和多重消化
①每种酶使用1μl，并适当扩大反应条件；
②反应混合物中酶的总体积不应超过总反应体积的1/10；
③如果酶需要不同的反应温度，从需要较低温度的酶开始，然后加入第二种酶并在较高温度下孵育。
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