从大肠杆茵中提取质粒dna的方法很多,其中的碱性别方法提取质粒是基于染色体dna与质粒dna的变性与复性存在差异而予以分离的。在强碱性条件下,染色体洲a和质粒dna均变性(双链解开)。由于质粒dna是共价闭合环状超螺旋结构,变性后两条互补链不会分开。当溶液ph调节到中性时.质粒dna容易复性并溶解在溶液中,而染色体dna不容易复性,互相继绕.在利用台式高速离心机进行离心时极易和蛋白质—3ds复合物等一起沉淀下来。转移出上演液,再用乙醇沉淀出其中的质粒dna。具体操作步骤如下:
(1)接种一单菌落于100ml lb液体培养基中,加入50μl的氨芐,37℃振荡培养8—10h,使培养达到饱和状态。
(2)取1.5ml培养液利用台式高速离心机离心20s,沉淀用100μl gte悬浮并于室温放置5min。
(3)加入200μl naoh/sds溶液,混匀,于冰上放置5min。
(4)加入150μl kac溶液,在mixmax旋涡混合器上振荡2s,于冰上放置5min。
(5)离心3min,然后吸取0.4ml上清液移入干净的微量离心管中,加入0.8ml无水乙醇,室温静置2min。
(6)室温下通过台式高速离心机进行离心3min,(使用台式高速离心机时一定要注意转速、时间控制以及操作规范)用lml 70%的乙醇洗涤沉淀,然后真空于燥。
(7)沉淀用30μl dd ho溶解,-20℃保存。
关键词:高速离心机 离心机
链板输送机需要注意的润滑要求
催生环境监测仪器新需求,钢铁排污许可制度实施
如何维护威格士柱塞泵
二手储罐卸料该怎么操作
20吨商业综合体厨房垃圾脱水机厂家供应
旋涡混合器提取质粒DNA
高密度聚乙烯预制直埋保温管分三层结构
橡塑保温板导热系数低
金属波纹管焊接注意事项有哪些
濮阳铝皮管道保温施工厂家
英国赛那斯CR162C二级倍频程声级计(cirrus)
BQC防爆型电磁起动器
日本小作坊式企业 支撑技术发展的特色企业
转子流量计常见的三种故障及解决办法?
辣椒含水率分析仪的使用方法
家用普通金库门定做
发酵罐作用与要求
全功能振动试验台是一种高精度的测试设备
恒温混匀仪好不好,看功能及市场反馈度
蛋白层析柱漏气怎么办?