二手LC液相色谱仪如何改善分离的选择性?

二手lc液相色谱仪分析中,通过向流动相中加入改性剂调节ph值和调节流动相的溶剂极性强度,可以改善分离的选择性。
一、向二手lc液相色谱仪流动相中加入改性剂调节ph值
(1)抑制溶质离子化:
反相液相色谱中,常向含水流动相中加入酸、碱或缓冲溶液,使流动相的ph值控制在一定数值,抑制溶质离子化,减少谱带拖尾,改善峰形,以提高分离选择性。例如在分析有机弱酸时,常向甲醇-水流动相中加入1%甲酸(或乙酸、磷酸、硫酸),抑制溶质离子化,以获得对称的色谱峰。对于弱碱性样品向流动相中加入1%三乙胺,也可以达到同样的效果。
(2)调节离子强度:
反相液相色谱中,当被分析物质是易离解的有机物时,随流动相ph值的增加,键合相表面残存的硅羟基和碱的阴离子的亲和能力增强,会引起峰形拖尾并干扰分离,可在流动性中加入0.1%~1%的乙酸盐、硫酸盐或硼酸盐。因为盐效应会减弱残存硅羟基的干扰作用,可抑制峰形拖尾并改善分离效果。但经常使用磷酸盐或卤化物,会造成硅烷化固定相的降解。
通常调节ph值对中性化合物的影响不大,但对带有离子化基团的化合物(如氨基、羧基和羟基等)保留因子影响可达10~30倍,分离度变化明显。但如果使用的流动相中加入了缓冲盐,要在使用前用纯水过渡。如果缓冲盐或离子对试剂浓度较低,需要较长时间平衡。
二、调节二手lc液相色谱仪流动相的溶剂极性强度
1、由强到弱:
一般先用90%的乙腈或甲醇-水或缓冲溶液进行试验,可很快得到分离结果,然后根据出峰情况调整有机溶剂(乙腈或甲醇)的比例。
2、三倍规则:
每减少10%的有机溶剂(乙腈或甲醇)的量,保留因子增加约3倍,此为三倍规则。调整时注意观察各个峰的分离情况。
3、粗调转微调:
当分离达到一定程度时,应将有机溶剂(乙腈或甲醇)10%的改变量调整为5%,并据此规则逐渐降低调整率,直至各组分的分离情况不再改变。

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