Lonza 4d-Nucleofector 96shuttle/384-well转染应用分享！
一，正序—体外基因编辑疗法
电穿孔方法进行t细胞基因编辑的瓶颈：电穿孔技术在以往研究中发现，当加入长的双链dna以及浓度非常高的情况下，会对细胞造成很高的毒性引发细胞死亡，短的单链dna就不会。
theo及其团队选择lonza 96 shuttle高通量电穿孔系统对crispr与dna的比例、细胞培养的不同方式、不同强度的电脉冲等参数进行摸索优化，很好的解决了双链dna对细胞毒性大的问题。theo等从健康人体内获得t细胞，利用lonza nucleofector技术更换了t细胞的tcr，使这些细胞能够特异性地攻击人黑色素瘤细胞。
二，新药开发—全基因组阵列crispr-cas9筛选
2019年，gsk（英国葛兰素史克公司glaxosmithkline）公司与加州大学创建了基因组研究实验室（lgr）。
slas2020国际会议与展览在t细胞中进行阵列crispr-cas9基因编辑筛选的384孔工作流程。
基于这一用于t细胞筛选的小型、稳健的高通量电转染方案和分析，gsk成功解决了原代t细胞的转染难题，并展示了全基因组阵列crispr-cas9筛选在原代细胞转染中的潜力。
三，新冠研究—高通量crispr筛选
加州大学旧金山分校的研究团队使用lonza 384-well nucleofector™ 来进行阵列crispr筛选，以识别增强或抑制病毒感染的宿主蛋白。
comparative host-coronavirus protein interaction networks reveal pan-viral disease mechanisms[j]. science (new york, n.y.), 370(6521):eabe9403.
四，新冠研究—高通量crispr筛选
巴斯德研究所的研究团队同样应用到了lonza 384-well nucleofector™ 系统进行高通量的crispr/cas9筛选，评估了1905个isg（ifn stimulated genes）在人肺上皮细胞中调节sars-cov-2复制的能力。
mac kain, a., maarifi, g., aicher, s. et al. 2021. identification of daxx as a restriction factor of sars-cov-2 through a crispr/cas9 screen.
五，sirna筛选靶点——开发脑瘤候选药物
丹麦癌症协会研究中心的研究人员基于lonza 384-well nucleofector™ 系统进行了高通量sirna文库筛选，采用的sirna库包含296个基因靶点，阳性对照（incenp9）和阴性对照(sirna的加扰对照)，每个基因设计了3个独立的 sirna。基于此，研究人员发现了胶质母细胞瘤的潜在靶点——spt6，并证实了spt6丢失诱导的dna双链断裂（dsb）是胶质母细胞瘤特异性的。
obara e , aguilar-morante d , rasmussen r d , et al. spt6-driven error-free dna repair safeguards genomic stability of glioblastoma cancer stem-like cells[j]. nature communications, 2020, 11(1):4709.
六，原代细胞转染——特发性肺纤维化治疗
阿斯利康采用lonza原代细胞，ipf肺成纤维细胞，探索了ipf(特发性肺纤维化idiopathic pulmonary fibrosis,ipf)的关键疾病驱动机制。在这项研究中，lonza 384-well nucleofector™ 系统成功对原代健康人类肺成纤维细胞的第2代细胞进行了crispr-cas9 rnp转染递送。研究结果证明了ppp1r15a在调节肺间充质细胞中的主要作用，并且提示了特发性肺纤维化的一种新治疗策略。
monkley s , overed-sayer c , parfrey h , et al. sensitization of the upr by loss of ppp1r15a promotes fibrosis and senescence in ipf[j]. scientific reports.
七，多质粒的高通量电穿孔，优化crispr碱基编辑
上海交通大学童垚俊教授团队开发了一种基于crispr-prime编辑技术的通用（无双链断裂）原核生物遗传操作工具箱，通过lonza 384-well nucleofector™ 系统进行高通量的多质粒电穿孔，实现了大肠杆菌的质粒和染色体的基因敲除、敲入、敲低、单碱基替换和组合编辑。
tong, y., jørgensen, t.s., whitford, c.m. et al. a versatile genetic engineering toolkit for e. coli based on crispr-prime editing. nat commun 12, 5206 (2021)
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电穿孔方法进行t细胞基因编辑的瓶颈：电穿孔技术在以往研究中发现，当加入长的双链dna以及浓度非常高的情况下，会对细胞造成很高的毒性引发细胞死亡，短的单链dna就不会。
theo及其团队选择lonza 96 shuttle高通量电穿孔系统对crispr与dna的比例、细胞培养的不同方式、不同强度的电脉冲等参数进行摸索优化，很好的解决了双链dna对细胞毒性大的问题。theo等从健康人体内获得t细胞，利用lonza nucleofector技术更换了t细胞的tcr，使这些细胞能够特异性地攻击人黑色素瘤细胞。
二，新药开发—全基因组阵列crispr-cas9筛选
2019年，gsk（英国葛兰素史克公司glaxosmithkline）公司与加州大学创建了基因组研究实验室（lgr）。
slas2020国际会议与展览在t细胞中进行阵列crispr-cas9基因编辑筛选的384孔工作流程。
基于这一用于t细胞筛选的小型、稳健的高通量电转染方案和分析，gsk成功解决了原代t细胞的转染难题，并展示了全基因组阵列crispr-cas9筛选在原代细胞转染中的潜力。
三，新冠研究—高通量crispr筛选
加州大学旧金山分校的研究团队使用lonza 384-well nucleofector™ 来进行阵列crispr筛选，以识别增强或抑制病毒感染的宿主蛋白。
comparative host-coronavirus protein interaction networks reveal pan-viral disease mechanisms[j]. science (new york, n.y.), 370(6521):eabe9403.
四，新冠研究—高通量crispr筛选
巴斯德研究所的研究团队同样应用到了lonza 384-well nucleofector™ 系统进行高通量的crispr/cas9筛选，评估了1905个isg（ifn stimulated genes）在人肺上皮细胞中调节sars-cov-2复制的能力。
mac kain, a., maarifi, g., aicher, s. et al. 2021. identification of daxx as a restriction factor of sars-cov-2 through a crispr/cas9 screen.
五，sirna筛选靶点——开发脑瘤候选药物
丹麦癌症协会研究中心的研究人员基于lonza 384-well nucleofector™ 系统进行了高通量sirna文库筛选，采用的sirna库包含296个基因靶点，阳性对照（incenp9）和阴性对照(sirna的加扰对照)，每个基因设计了3个独立的 sirna。基于此，研究人员发现了胶质母细胞瘤的潜在靶点——spt6，并证实了spt6丢失诱导的dna双链断裂（dsb）是胶质母细胞瘤特异性的。
obara e , aguilar-morante d , rasmussen r d , et al. spt6-driven error-free dna repair safeguards genomic stability of glioblastoma cancer stem-like cells[j]. nature communications, 2020, 11(1):4709.
六，原代细胞转染——特发性肺纤维化治疗
阿斯利康采用lonza原代细胞，ipf肺成纤维细胞，探索了ipf(特发性肺纤维化idiopathic pulmonary fibrosis,ipf)的关键疾病驱动机制。在这项研究中，lonza 384-well nucleofector™ 系统成功对原代健康人类肺成纤维细胞的第2代细胞进行了crispr-cas9 rnp转染递送。研究结果证明了ppp1r15a在调节肺间充质细胞中的主要作用，并且提示了特发性肺纤维化的一种新治疗策略。
monkley s , overed-sayer c , parfrey h , et al. sensitization of the upr by loss of ppp1r15a promotes fibrosis and senescence in ipf[j]. scientific reports.
七，多质粒的高通量电穿孔，优化crispr碱基编辑
上海交通大学童垚俊教授团队开发了一种基于crispr-prime编辑技术的通用（无双链断裂）原核生物遗传操作工具箱，通过lonza 384-well nucleofector™ 系统进行高通量的多质粒电穿孔，实现了大肠杆菌的质粒和染色体的基因敲除、敲入、敲低、单碱基替换和组合编辑。
tong, y., jørgensen, t.s., whitford, c.m. et al. a versatile genetic engineering toolkit for e. coli based on crispr-prime editing. nat commun 12, 5206 (2021)
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