超灵敏细胞计数试剂盒-8(cck-8)通过利用高度水溶性的四唑盐-wst-8进行非常方便的测定。wst-8被细胞中的脱氢酶还原,产生橙色产物(甲赞),可溶解在组织培养基中。cck-8是非放射性的,允许在细胞增殖和细胞毒性测定中进行灵敏的比色测定,以测定活细胞的数量。细胞中甲酰胺的含量与活细胞的数量成正比,可用于检测细胞增殖和细胞毒性。使用cck-8的检测灵敏度高于使用其他四氮唑盐如mtt、xtt、mts或wst-1的检测灵敏度。
艾美捷超敏型细胞增殖检测试剂(cck-8)基本参数:
目录号:d-ake106-u
规格:1000t / 10000t
储存:在4°c下储存12个月,在-20°c下至少储存24个月,避光
超敏型细胞增殖检测试剂(cck-8)供应材料和储存条件:
试剂准备:
即用cck-8溶液:即用,无需预混合成分。
程序分析:
注意:在实际实验之前,做一个预实验,以确定合适的细胞数量和培养时间。如果od值过高,可以适当减少细胞数量,可以缩短添加cck-8的孵育时间,或者可以减少cck-8负载量
一、绘制标准曲线
1.用细胞仪计数制备的细胞悬浮液中的细胞数量,然后接种细胞。
2.用培养基稀释细胞,按顺序形成细胞浓度梯度,通常为5-7个细胞浓度梯度、每个浓度梯度4-6个多孔。
3.接种后,将粘附细胞或悬浮细胞孵育0.5-4h,每100μl培养基加入10μl cck-8试剂孵育一定时间,然后测量od450值。以单元格数为x轴,od450值为y轴,绘制标准曲线。根据该标准曲线,可以确定未知样品中细胞的数量。使用该标准曲线的前提条件是测试条件完-全相同
二、细胞活性测定方案
1.在96孔板中接种细胞悬浮液(100μl/孔)。将培养板放入湿润的二氧化碳培养箱中进行预培养。
2.在板的每个孔中加入10μl cck-8溶液。小心不要将气泡引入井内,因为它们会干扰外径读数。
3.将培养板在培养箱中培养0.5-4小时。培养时间取决于细胞类型和细胞密度等实验条件。
4.使用微孔板读数器测量450 nm处的吸光度。
三、细胞增殖和细胞毒性测定方案
1.在96孔板中分配100μl细胞悬浮液(5000个细胞/孔)。预孵育用于24小时除湿二氧化碳培养箱的平板。
2.将1-10μl不同浓度的待测物质加入平板中。
3.将培养板在培养箱中培养适当的时间长度(例如,6、12、24或48小时)。
4.在板的每个孔中加入10μl cck-8溶液。小心不要将气泡引入井内,因为它们会干扰外径读数。
5.将培养板在培养箱中培养0.5-4小时。培养时间取决于细胞类型和细胞密度等实验条件。
6.使用微孔板读数器测量450 nm处的吸光度
超敏型细胞增殖检测试剂(cck-8)faq:
1.本品敏感,od值偶尔偏高。我们应该如何处理?
从三个方面进行调整:(1)使用不同数量的细胞进行检测,制作标准曲线,确定合适的细胞数量;(2) 缩短cck-8的孵育时间;(3) 降低cck-8的负载量,将cck8稀释到合适的浓度以供使用。
2.如何确定该产品的检测范围?
建议制作不同细胞数的标准曲线,并根据稳定的线性趋势确定特定细胞的检测间隔。
3.如何设置细胞毒性测试?
设置方法有两种:(1)将1-10μl不同浓度的待测物质加入100μl的细胞悬浮液中,孵育适当的时间,然后加入系统中10%的溶液。(2) 在药物暴露于细胞一段时间后,使用10%cck-8检测细胞增殖。
该试剂仅用于科学研究领域,不适用于临床诊断或其他用途。
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