荧光分光光度计基本结构及特点
荧光分光光度计是用于扫描液相荧光标记物所发出的荧光光谱的一种仪器。其能提供包括激发光谱、发射光谱以及荧光寿命、荧光偏振、荧光强度、量子产率等许多物理参数,从各个角度反映了分子的成键和结构情况。通过对这些参数的测定, 不但可以做一般的定量分析, 而且还可以推断分子在各种环境下的构象变化, 从而阐明分子结构与功能之间的关系。
荧光分光光度计基本结构
1. 光源：
为高压汞蒸气灯或氙弧灯，后者能发射出强度较大的连续光谱，且在300nm～400nm 范围内强度几乎相等，故较常用。
2.检测器：
一般用光电管或光电倍增管作检测器。可将光信号放大并转为电信号。
3. 样品室：
通常由石英池(液体样品用)或固体样品架(粉末或片状样品)组成。测量液体时，光源与检测器成直角安排；测量固体时，光源与检测器成锐角安排。
4.发射单色器：
置于样品室和检测器之间的为发射单色器或第二单色器，常采用光栅为单色器。筛选出特定的发射光谱。
5.激发单色器：
置于光源和样品室之间的为激发单色器或*单色器，筛选出特定的激发光谱。
荧光分析的特点：
1.高灵敏度：荧光分析的灵敏度比分光光度计法大 2 ～ 3 个数量级。 分光光度法通常在 10-7 级 ，而荧光的灵敏度达10-9。
2.强选择性：荧光物质具有2种特征光谱：激发光谱和吸收光谱，分光光度法通过测定物质的吸收光谱来分析，而荧光可根据激发光谱和发射光谱来鉴定物质。
3.信息量丰富：能提供荧光物质的多种参数。
4.不足之处：①很多物质本身不发荧光；②荧光的产生与化合物结构的关系不明确；③干扰因素多，光分解、氧淬灭、易污染。
荧光分析的常用方法：
1.直接测定法：利用物质本身发出的荧光来进行测定。因为大部分物质不发荧光，该法少用。
2.间接测定法：物质本身不发荧光，跟荧光探剂结合后转变成荧光物质进行测定。
3. 荧光探针探剂的条件：⑴ 探剂与被测物质分子的某一微区必须有特异性结合且牢固；
⑵ 探剂的荧光必须对环境条件灵敏；
⑶ 结合的探剂不会影响被测物质的分子结构和特性；
⑷ 能利用荧光淬灭和光分解等对荧光进行有效定量和定性分析。
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2.检测器：
一般用光电管或光电倍增管作检测器。可将光信号放大并转为电信号。
3. 样品室：
通常由石英池(液体样品用)或固体样品架(粉末或片状样品)组成。测量液体时，光源与检测器成直角安排；测量固体时，光源与检测器成锐角安排。
4.发射单色器：
置于样品室和检测器之间的为发射单色器或第二单色器，常采用光栅为单色器。筛选出特定的发射光谱。
5.激发单色器：
置于光源和样品室之间的为激发单色器或*单色器，筛选出特定的激发光谱。
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2.强选择性：荧光物质具有2种特征光谱：激发光谱和吸收光谱，分光光度法通过测定物质的吸收光谱来分析，而荧光可根据激发光谱和发射光谱来鉴定物质。
3.信息量丰富：能提供荧光物质的多种参数。
4.不足之处：①很多物质本身不发荧光；②荧光的产生与化合物结构的关系不明确；③干扰因素多，光分解、氧淬灭、易污染。
荧光分析的常用方法：
1.直接测定法：利用物质本身发出的荧光来进行测定。因为大部分物质不发荧光，该法少用。
2.间接测定法：物质本身不发荧光，跟荧光探剂结合后转变成荧光物质进行测定。
3. 荧光探针探剂的条件：⑴ 探剂与被测物质分子的某一微区必须有特异性结合且牢固；
⑵ 探剂的荧光必须对环境条件灵敏；
⑶ 结合的探剂不会影响被测物质的分子结构和特性；
⑷ 能利用荧光淬灭和光分解等对荧光进行有效定量和定性分析。
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