醋酸铅培养基的检验原理与使用方法及应用研究！
醋酸铅培养基的检验原理与使用方法及应用研究！
一、背景
醋酸铅培养基用于细菌的硫化氢试验，成分(g/l)：蛋白胨：10.0；牛肉浸粉：3.0；氯化钠：5.0；硫代硫酸钠：2.5；琼脂：12.0；ph值7.3±0.1，25℃。
原理：细菌能分解培养基中的含硫氨基酸（如胱氨酸、半胱氨酸）产生硫化氢，硫化氢遇铅或亚铁离子则形成黑褐色的硫化铅或硫化铁沉淀。此试验可间接检测细菌是否产生硫化氢。
用法：称取本品32.5g，加热溶解于1000ml蒸馏水中，分装三角瓶，每瓶100ml，115℃高压灭菌15分钟，冷至50℃左右时，加入过滤除菌的10%醋酸铅溶液1ml，混匀，分装试管，每管约3-4ml，冷却，备用。
检测结果：培养基变黑为阳性，不变为阴性。
醋酸铅培养基主要用于肠杆菌科中属及种的鉴别。如沙门菌属、爱德华菌属、亚利桑那菌属、枸橼酸杆菌属、变形杆菌属细菌，绝大多数硫化氢阳性，其他菌属阴性。沙门菌属中也有硫化氢阴性菌种。
肠杆菌科包括无芽孢、周身鞭毛或无鞭毛的革兰氏染色阴性直杆菌。
化能有机营养，兼营呼吸代谢和发酵代谢；可通过氧化多种简单有机化合物或发酵糖、有机酸或多元醇来获取能量；大部分能在含有一种碳源的无机氮培养基上生长；有些种生长时需要某种氨基酸或水溶性维生素；除个别血清型外，接触酶均为阳性，氧化酶阴性；除欧文氏菌属中的少数种外，均还原硝酸盐为亚硝酸盐；dna（脱氧核糖核酸）中的g+c（鸟嘌呤和胞嘧啶）克分子含量为39～59%。
二、应用
用于酿酒酵母硫化氢合成的转录组学研究：
采用rna-seq技术对酿酒酵母不同发酵时期的基因转录特征进行研究,筛选与h2s合成相关的差异表达基因,为揭示酿酒酵母产h2s的分子机制及为优良酿酒酵母的选育提供理论依据,对改善葡萄酒的风味和感官品质具有重要意义。
研究得到了以下主要结果：
1、采用biggy琼脂和triple m模拟汁发酵对181株酿酒酵母的产h2s特性进行了研究。（1）根据菌株在biggy琼脂上形成的菌落颜色,发现本实验室筛选的181株酿酒酵母中有119株高产h2s菌株、48株中产h2s菌株、9株低产h2s菌株、5株不产h2s菌株。
（2）从这181株菌中筛选19株菌进行triple m模拟汁发酵,并以ucd932和ucd522为对照,根据菌株在triple m模拟汁发酵中h2s总产量的不同,将这21株酵母菌分为不产（0-1 ppm）、低产（1-200 ppm）、中产（200-1000 ppm）和高产h2s菌株（>1000 ppm）四个等级。其中,不产h2s的菌株共4株,分别为112y4,ucd932,112y14,174y1;低产h2s的菌株共5株,分别为lfp515,lfp506,44y2,lfp525-4,lfp525;中产h2s的菌株共8株,分别为ucd522,lfn520,lfn524-6+lfp525-4,lfn524,lfn511,32y15,31y3,31y9;高产h2s的菌株共4株,分别为lfn524-4,lfp525-2,lfn524-6,32y12。
2、采用50se策略,通过illuminahiseq 2000对不产h2s菌株112y4和高产h2s菌株32y12在triple m模拟汁发酵第40 h（产h2s前期,样品编号为112y4-ⅰ和32y12-ⅰ）、88 h（产h2s时期,样品编号为112y4-ⅱ和32y12-ⅱ）和160 h（产h2s末期,样品编号为112y4-ⅲ和32y12-ⅲ）三个不同发酵时期的18个样品进行了rna-seq测序。（1）获得了大量高质量的数据,所有样品的clean reads都超过5800000,且所有样品与参考基因的总比对率都超过76%,其中比对率（unique match）都超过71%;与参考基因组的总比对率都超过94%,其中比对率都超过84%。
（2）对测序结果进行测序质量评估、测序饱和度分析、测序随机性分析及基因覆盖度分析等发现所有样品的测序随机性好,测序深度都达到了后续生物信息学分析的要求。
（3）将clean reads分别与s288c参考基因组匹配,在参考基因组的6500个基因中,这18个样品的转录组中能检测到的表达基因数都超过5649个。
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醋酸铅培养基主要用于肠杆菌科中属及种的鉴别。如沙门菌属、爱德华菌属、亚利桑那菌属、枸橼酸杆菌属、变形杆菌属细菌，绝大多数硫化氢阳性，其他菌属阴性。沙门菌属中也有硫化氢阴性菌种。
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1、采用biggy琼脂和triple m模拟汁发酵对181株酿酒酵母的产h2s特性进行了研究。（1）根据菌株在biggy琼脂上形成的菌落颜色,发现本实验室筛选的181株酿酒酵母中有119株高产h2s菌株、48株中产h2s菌株、9株低产h2s菌株、5株不产h2s菌株。
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