辅酶ⅰnad(h)含量的测定意义及原理!
辅酶ⅰ是生物体内必需的一种辅酶,在生物氧化过程中起著传递氢的作用,能活化多种酶系统,促进核酸、蛋白质、多糖的合成及代谢,增加物质转运和调节控制,改善代谢功能。
测定意义:
辅酶ⅰnad(h)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,nad+是糖酵解(emp)和三羧酸循环(tca)的主要氢受体,生成的nadh经呼吸电子链(etc)传递把电子交给氧,在合成atp的同时,形成大量的ros,同时nadh再生为nad+。糖、脂、蛋白质三大代谢物质分解中的氧化反应绝大部分通过这一体系完成。nad(h)含量和nadh/nad+比值的高低可用于评价糖酵解和tca循环的强弱。较高的nad(h)及nadh/nad+比值说明细胞呼吸耗氧量较高,处于过氧化状态。此外,nadh/nad+比值升高也可抑制糖酵解和tca循环。另外,nad+降解产物对细胞信号传导、代谢和基因表达等具有重要的调控作用。
检测原理:
分别用酸性和碱性提取液提取样品中nad+和nadh,nadh通过pms的递氢作用,还原氧化型噻唑蓝(mtt)为甲瓒,在570nm下检测吸光值;而nad+可被乙醇脱氢酶还原为nadh,进一步采用mtt还原法检测。
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